1.按反應(yīng)時間分類法:20世紀(jì)50年代以前大都使用固定時間法。這種方法是以酶催化反應(yīng)的平均速度來計算酶的活性,現(xiàn)多已不用。50年代中期開始采用連續(xù)監(jiān)測法。這種方法用自動生化分析儀上完成,可以測酶反應(yīng)的初速度,其結(jié)果遠(yuǎn)比固定時間法準(zhǔn)確,在高濃度標(biāo)本尤為明顯,但本法也受到反應(yīng)時間,反應(yīng)溫度,試劑等的影響,應(yīng)加以注意。
(1)定時法:(兩點法)
通過測定酶反應(yīng)開始后某一時間段內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應(yīng)初速度的方法。其中t1往往取反應(yīng)開始的時間。
酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間,通過加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白沉淀劑等,使反應(yīng)完全停止(也叫中止反應(yīng)法)。加入試劑進(jìn)入化學(xué)反應(yīng)呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。
該法最基本的一點是停止反應(yīng)后才測定底物或物的變化。
優(yōu)點:簡單易行,對試劑要求不高。
缺點 醫(yī),學(xué).全在.線搜集.整理 zxtf.net.cn:難保證測定結(jié)果的真實性。
難以確定反應(yīng)時間段酶促反應(yīng)是否處于線性期。隨著保溫時間的延續(xù),酶變性失活加速。
(2)連續(xù)監(jiān)測法:又稱為動力學(xué)法或速率法、連續(xù)反應(yīng)法。
在酶反應(yīng)過程中,用儀器監(jiān)測某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時間的變化所發(fā)生的改變,通過計算求出酶反應(yīng)初速度。
連續(xù)監(jiān)測法根據(jù)連續(xù)測得的數(shù)據(jù),可選擇線性期的底物或產(chǎn)物變化速率用于計算酶活力。
因此連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性比定時法更準(zhǔn)確。
實際工作中,采用工具酶的酶偶聯(lián)法已經(jīng)成為應(yīng)用最廣、最頻繁測酶活性濃度的方法。
(3)平衡法:通過測定酶反應(yīng)開始至反應(yīng)達(dá)到平衡時產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法,又叫終點法。
2.按檢測方法分類法:
①分光光度法;
②旋光法;
③熒光法;
④電化學(xué)方法;
⑤化學(xué)反應(yīng)法;
⑥核素測定法;
⑦量熱法
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