中國(guó)幽門螺桿菌研究:胃粘膜幽門螺桿菌感染檢測(cè)方法對(duì)比研究

自1983年澳大利亞學(xué)者Warren和Marshall報(bào)告在人胃粘膜活檢組織中分離出幽門螺桿菌（Helicobacter pylori·Hp)以來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)Hp和上消化道，尤其是胃和十二指腸疾病的關(guān)系，有關(guān)Hp感染的檢測(cè)方法等問題進(jìn)行了大量研究和報(bào)道，并取得了一定成果；目前多數(shù)學(xué)者公認(rèn)Hp感染與慢性胃炎、消化性潰瘍的發(fā)生、治療及預(yù)后有著重要關(guān)系，因此研究Hp感染的檢測(cè)方法；如何提高Hp感染檢出率，是當(dāng)前學(xué)者研究的熱點(diǎn)，并提出了快速尿素酶藥盒檢測(cè)法、活檢胃粘膜印片法及病理切片各種染色光鏡檢查法、血液Hp培養(yǎng)法、抗Hp抗體檢測(cè)法，尿素酶呼吸試驗(yàn)法、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR)擴(kuò)增尿素酶A或B基因檢測(cè)法等；但上述方法中，有些價(jià)格昂貴、操作復(fù)雜，有些費(fèi)時(shí)費(fèi)事，故很難在廣大基層醫(yī)院推廣。本研究的目的在于對(duì)一般基層醫(yī)院能開展的快速尿素酶法、胃粘膜印片法、病理切片染色檢查法進(jìn)行對(duì)比研究，試圖尋找出能提高Hp感染陽(yáng)性檢出紗的互補(bǔ)方法，并對(duì)大津科銳公司生產(chǎn)的快速尿素酶試劑盒進(jìn)行評(píng)價(jià)，從而有利于使更多醫(yī)院能對(duì)Hp與上消化道疾病的關(guān)系進(jìn)行臨床研究。

1　對(duì)象和方法

1.1　對(duì)象

本研究組為1995—04～1996—02—01，因具有各種上消化道癥狀到本院消化內(nèi)科門診就診及在消化內(nèi)科信婃的病人共100例，其中男73例、女27例，年齡在18歲～80歲，平均年齡44.7歲。經(jīng)纖維內(nèi)鏡直觀及活組織病理檢查證實(shí)：慢性萎縮性胃炎43例、十二指腸球部潰瘍27例、胃潰瘍3例、病程在0.5a～30a；所有病人均在多所醫(yī)院治療并均正在服用質(zhì)子泵抑制劑、H₂受體阻滯劑，各種鉍劑、中藥，少數(shù)病人曾服用過羥氨芐青霉素，痢特靈、慶大霉素等藥物；對(duì)上述病人不加選擇全部進(jìn)入本研究組。

1.2　方　法

首先于胃鏡檢查時(shí)均于距幽門口3cm～5cm處取活組織1～2塊，同時(shí)用尿素快速檢測(cè)法、印片法、病理切片染色法檢查胃粘膜Hp感染情況；其次于病變明顯處取活組織2～4塊做病理組織學(xué)檢查，以協(xié)助胃鏡直觀所見做出正確臨床診斷；Hp檢測(cè)的三種具體方法是：快速尿素酶法——將兩滴試劑滴入反應(yīng)板孔中，再將所取的胃粘膜塊放入其中，觀察5min，如變?yōu)榧t色者為陽(yáng)性，不變色者為陰性（本研究試劑盒由天津科銳公司提供)；粘膜印片法——將所取之粘膜用鉗子鉗好，以其粘膜面對(duì)準(zhǔn)清潔玻片反復(fù)印片，待玻片印片處干燥后用1％中性紅染液1～2滴滴于該處，染色5min后蒸餾水緩緩將染液沖去，自然干燥，加蓋玻片封存，在光鏡下可見呈彎曲狀或S狀、紅色幽門螺桿菌（此法先于快速尿素酶法，將印片后的組織再做快速尿素酶檢測(cè)用)；病理切片染色法——對(duì)所取之粘膜先用10％福爾馬林固定、切片、美藍(lán)染色、透明中性表封固在光鏡下可見直徑為0.3μm～0.5μm1，長(zhǎng)1.0μm～1.5μm，弧形或S形的幽門螺桿菌。

2　結(jié)果

本組100例病人快速尿素酶法Hp陽(yáng)性者31例、粘膜印片法陽(yáng)性者47例、病理切片美藍(lán)染色法陽(yáng)性者44例，陽(yáng)性檢出率分別為31％，47％及44％，天津科銳公司提供的快速尿素酶試劑盒檢測(cè)Hp結(jié)果的病理切片（“金標(biāo)準(zhǔn)”)對(duì)比，快速尿素酶法假陰性13例、假陽(yáng)性2例，印片法＋病理檢查法陽(yáng)性者共50例、陽(yáng)性檢出率可達(dá)50％；詳情見表1。天津科銳公司提供的試劑盒做快速尿素酶試驗(yàn)在同樣病人檢出Hp感染的陽(yáng)性率低于印片法及病理檢查法。和后兩種方法比較有一定差異（P＜0.05，表1)。

表1　三種方法檢測(cè)100例病人胃粘膜Hp感染結(jié)果　（n：100)

三種方法對(duì)受檢之100例病人中共5種疾病，其結(jié)果不盡相同，但均以十二指腸球部潰瘍Hp感染檢出陽(yáng)性率最高，快速尿素酶法為40.7％、印片法為63.0％、病理染色為55.6％，平均為53.1％（表2)。

表2　三種方法與五種疾病胃粘膜Hp感染檢出情況

3　討論

為進(jìn)一步研究Hp感染與上消化道一些疾病的關(guān)系，提高診斷治療效果，近十多年以來，國(guó)內(nèi)學(xué)者在Hp的研究中，對(duì)Hp檢測(cè)方法的研究十分重視；大量國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)一致認(rèn)為：快速尿素酶試驗(yàn)法、血液Hp培養(yǎng)法、活檢胃粘膜切片各種染色光鏡檢查法、抗Hp抗體檢測(cè)法、尿素酶呼吸試驗(yàn)法、聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增尿素酶基因檢測(cè)法，其特異性強(qiáng)、敏感度高可做為檢測(cè)Hp感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”（Gold Standard)近些年提出的“活檢胃粘膜印片法”，其特異性、敏感性、陽(yáng)性檢出率也較高，可在臨床推廣應(yīng)用；方法雖多，但仍以聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增尿素酶基因檢測(cè)法之特異性、敏感度最高，分別為100％及96％～98％，且可用於唾液、胃液、糞便中Hp檢測(cè)。遺憾的是這些方法，價(jià)格昂貴、操作持技術(shù)復(fù)雜、費(fèi)事費(fèi)時(shí)，難於在基層醫(yī)院廣泛開展。其它方法由於特異性差或敏感性低，故其陽(yáng)性檢出率低，甚致出現(xiàn)假陰性或假陽(yáng)性。張家濱等在1603例快速尿素酶檢測(cè)中慢性胃炎陽(yáng)性率為55％和賈博琦報(bào)告的54.7％近似（其中慢性淺表性胃炎的陽(yáng)性率為49.7％)，十二指腸潰瘍的陽(yáng)性率為79.1％，胃潰瘍的檢出率為77.8％，胃癌的陽(yáng)性檢出率為51.9％（14/27)；高國(guó)藩等對(duì)1800例病人中用活檢胃粘膜印片法檢測(cè)中慢性淺表性胃炎陽(yáng)檢出率為23.0％，萎縮性胃炎為51.5％，十二指腸潰瘍?yōu)?9.0％、胃潰瘍?yōu)?9.7％；徐朝斌等在對(duì)386例胃粘膜病理切片用銀染色法檢測(cè)其Hp，總檢出率為70.5％，其中慢性活動(dòng)性胃炎為97.6％，非活動(dòng)性胃炎為56.71％。上述國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)告的這三種方法，尤其是快速尿素酶檢測(cè)法，其特異性、敏感性及陽(yáng)性檢出率均不夠理想。本文對(duì)這三種方法對(duì)比研究結(jié)果顯示其陽(yáng)性檢出率更低，快速尿素酶法僅為31％，胃粘膜印片法為47％，病理切片法（美藍(lán)染色)為44％；分析其原因主要有三；一是本組100例病人均是在服用質(zhì)子泵抑制劑、H₂受體阻滯劑、各種鉍劑、痢特靈、慶大霉素及中藥的同時(shí)進(jìn)行的檢查，而不是在停藥1個(gè)月后再做檢查、更不是初診從未接受過治療的人，眾所周知上述藥物均有不同程度的抗Hp作用，而檢查時(shí)病人正處于胃粘膜Hp感染被清除的階段，故陽(yáng)性檢出率低（國(guó)內(nèi)上述文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)此問題均未做交待)；二是Hp在胃竇分布多呈灶性分布，每次取材不一定能準(zhǔn)確的把隱藏Hp的粘膜都取出，也會(huì)影響Hp檢出率；三是本組中十二指腸潰瘍Hp檢出率是最高的，這也會(huì)影響本組陽(yáng)性檢出率，但從三種方法檢查結(jié)果來看其陽(yáng)性率和國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道也有相同之處，即尿素酶檢測(cè)法陽(yáng)性率低于胃粘膜印片檢檢查法和胃粘膜印片檢查法的陽(yáng)性率；本文病理切片檢查法和胃粘膜印處近似，并不高于胃粘膜印片法是與病理切片染色方法有關(guān)，即本文病理切片不是銀染色、而是美藍(lán)染色。另外從本組1zxtf.net.cn/shiti/00例檢查結(jié)果來看三種方法均呈現(xiàn)十二指腸潰瘍者Hp檢出率最高，依次為慢性胃炎、胃潰瘍及胃炎，這些結(jié)果和國(guó)內(nèi)外報(bào)道也一致。綜合上述我們認(rèn)為：一、天津科銳公司生產(chǎn)的快速素酶試驗(yàn)劑盒是可以推廣應(yīng)用的，二、為在基層小醫(yī)院能更好的開展Hp感染與上消化道疾病關(guān)系的研究，還應(yīng)推出一種能提高Hp陽(yáng)性檢出率、且能在小醫(yī)院開展的互補(bǔ)檢測(cè)法。

Hp感染與上消化道疾病關(guān)系的研究將是二十一世紀(jì)研究的熱點(diǎn)，但使用特異性、敏感性、陽(yáng)性率高的一此復(fù)雜昂貴的技術(shù)，僅能在少數(shù)較大醫(yī)院及研究機(jī)構(gòu)開展是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的；只有在眾多的基層小醫(yī)院開展并有更多的消化科醫(yī)師參加，才能加快研究速度、更早的高搞清Hp感染和上消化道疾病的關(guān)系。為此我們提出如下設(shè)想，供同行考慮；一是對(duì)每例病人最好都做二種或三種本文提出的方法，如同時(shí)采用快速尿素酶檢測(cè)法及胃粘膜印片法，爭(zhēng)取病理切片銀染法以進(jìn)行互補(bǔ)檢查，把二種或三種檢查所檢出的Hp真陽(yáng)性率相加去提高檢出率——即互補(bǔ)檢查法。二是鑒于胃粘膜中Hp感染的灶分布特點(diǎn)，建議在做快速尿素酶法檢查時(shí)每例病人在胃竇不同部位最少取兩塊活zxtf.net.cn/yaoshi/組織，可能有望提高其陽(yáng)性檢出率，三是請(qǐng)生產(chǎn)快速尿素酶檢查試劑盒的廠家進(jìn)一步在如何提高藥盒的敏感染度上下功夫進(jìn)行改進(jìn)，也有可能提高Hp感染陽(yáng)性檢出率，如能在消除假陽(yáng)性上做一改進(jìn)則更好；以上是通過本組研究后的想法，是否恰當(dāng)，需進(jìn)一步研究。