本品系用結核菌的液體培養(yǎng)物，經殺菌后除去菌體，加溫濃縮制成的粘性液體，含有結核菌的新陳代謝產物，對已受結核菌感染或曾接受卡介苗免疫的相體，能引起特異的變態(tài)反應。用以檢查是否已受結核菌的感染及觀察免疫反應。
1 菌種
1.1 由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或經同意。
1.2 制造舊結核菌素的菌種為人型結核菌。
1.3 菌種可凍干保存，亦可保存于駱（Lowenstein)氏培養(yǎng)基上，每3～6個月傳代一次。
2 制造
2.1 啟開菌種接種于駱氏培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)2～3周，然后移種在蘇通綜合培養(yǎng)基或其他適宜培養(yǎng)基上，于27℃表面培育2～3周，再在甘油肉湯或蘇通培養(yǎng)基上移種1～2代供大量接種之用。
2.2 接種
用接種環(huán)挑取一塊生長良好的菌膜，輕輕移種于5%（ml/ml)甘油肉湯或其他適宜培養(yǎng)基的表面，菌膜應不下沉。
接種后37℃培育8～10周，要避免振動以免菌膜下沉。培育3周左右如培養(yǎng)瓶中菌膜未鋪滿表面，或培養(yǎng)期間有污染者應廢棄。
2.3 殺菌
高壓蒸汽121℃30分鐘，或100℃流動蒸汽加熱1小時。
2.4 殺菌后用無菌絨布或濾紙過濾除去菌體。
2.5 濃縮
濾液置蒸發(fā)皿中于75～80℃水浴上加溫蒸發(fā)。應在通風柜內進行，并不時攪拌（亦可用其他方法)。濃縮至約為原量的1/10。
2.4 殺菌后用無菌絨布或濾紙過濾除去菌體。
2.5 濃縮
濾液置蒸發(fā)皿中于75～80℃水浴上加溫蒸發(fā)。應在通風柜內進行，并不時攪拌（亦可用其他方法)。濃縮至約為原量的1/10。
2.5.1 濃縮后取樣少許，進行效價測定（參見2.7.4項)。如效價較標準舊結核菌素為低，應再適zxtf.net.cn/job/當濃縮，如較標準為高，可加入適量滅菌蒸餾水或50%（ml/ml)甘油，再重新抽樣測定效價，直至合格。然后，加入0.25%～0.5%（g/ml)苯酚或其他適宜防腐劑。
2.5.2 不同菌株生產的舊結核菌素可混合后進行濃縮，亦可分別濃縮，效價測定合格后混合。
2.5.3 濃縮后的舊結核菌素應放2～8℃最少1個月，使不溶解的物質析出并除去（如用離心沉淀法)。然后除菌處理，并做無菌試驗。
2.6 分批
同日殺菌的舊結核菌素作為1批， 同時有數(shù)瓶者，按瓶分為亞批。
2.7 半成品檢定
2.7.1 物理檢查
舊結核菌素為深棕色澄明液體，不應含渣粒、沉淀物或其他雜質，并有特殊的氣味。
2.7.2 無菌試驗
按《生物制品無菌試驗規(guī)程》進行。
2.7.3 安全試驗
用體重300～400g的健康豚鼠2只，每只腹腔注射1.0ml，觀察6周，豚鼠應活存。到期解剖，肉眼觀察應夫任何進行性結核病變。如在觀察期間豚鼠死亡，以加倍量動物進行復試。
2.7.4 效價測定
標準舊結核菌素由中國藥品生物制品檢定所發(fā)給。
2.7.4.1 動物試驗
將標準及待檢結核菌素分別稀釋成1:1000、1:500、1:100等3個稀釋度，用體重400～600g已致敏的白色豚鼠最少4只，去毛后于背部脊柱兩側相對部位分別皮內注射上述稀釋度的舊結核菌素各0.1ml（從尾側起先注射稀釋度高者)。于注射后24、48、72小時各觀察結果一次（亦可根據(jù)48小時的反應)，算出待檢和標準舊結核菌素的反應面積總和之比即為反應總面積比。同樣也可求出標準舊結核菌素的平均反應)。比值1±0.1者為合格。
2.7.4.2 人體反應測定
動物試驗合格后做人體反應測定，選擇對舊結核菌素1個單位反應陽性的敏感成人最少4人，每人于兩前臂內側皮內相對部位分別注射10單位、5單位、2.5單位的標準及待檢舊結核菌素各0.1ml，注射生24、48及72小時觀察結果，并求出其比值（計算方法與2.7.4.1項相同)。不同濃度亦可不在同一人身上注射，但人數(shù)要增加，每個稀釋度最少4人。
2.8 分裝
物理檢查、無菌試驗、安全試驗及效價測定合格后即可分裝，分裝后抽樣做成品檢定。
3 成品檢定
包括物理檢查、無菌試驗、安全試驗等，試驗方法見2.7項。
4 保存與效期
保存于2～8℃暗處。自檢定合格之日起效期為5年。
5 稀釋舊結核菌素
5.1 稀釋用的舊結核菌素應為經檢定合格并未過效期者。
5.2 可用含有0.25%～0.5%(g/ml)苯酚或其他適宜防腐劑的生理鹽水或緩沖生理鹽水稀釋，使每ml含50單位。
5.3 稀釋舊結核菌素應進行無菌試驗。防腐劑試驗：用體重18～20g之健康小白鼠2只，每只皮下注射稀釋舊結核菌素0.5ml。用苯酚作防腐劑量，小白鼠會出現(xiàn)戰(zhàn)粟癥狀，但不應超過半小時，觀察7天，不得有局部膿腫或死亡。
5.4 稀釋舊結核菌素效期自檢定合格之日起為42天。保zxtf.net.cn/Article/存于2～8℃暗處。
