1 試劑
1.1 瓊聚糖4B凝膠。
1.20.2mol /L 氯化鈉溶液，pH7.0洗脫液。
1.3 藍(lán)色葡聚糖2000（2～4mg)加維生素B12（0.2mg)，加蒸餾水1ml溶解。
2 儀器
2.1 層析柱（1.5～1.6×100cm)。
2.2 206nm波長(zhǎng)紫外監(jiān)測(cè)儀。
2.3 部分收集器及試管。
2.4 凝膠和洗脫液儲(chǔ)瓶，適宜的控制裝置和記錄器。
3 操作
3.1 瓊聚糖4B凝膠的漂洗
取瓊聚糖4B凝膠約300ml，加0.2mol /L 氯化鈉溶液500ml，充分?jǐn)嚢瑁o置1～2小時(shí)，傾去上層液體和懸浮于其中的細(xì)小顆粒，重復(fù)上述操作數(shù)次后至上層液體無細(xì)小顆粒，置真空罐內(nèi)，抽去凝膠中的空氣。
3.2 裝柱
將洗好的瓊聚糖4B凝膠慢慢注入柱中，避免夾雜氣泡，裝至約90cm，調(diào)整流速為10～12ml /小時(shí)，流洗2天。
3.3 標(biāo)定
空流體積（Vo)及柱床總體積（Vi)www.med126.com
取藍(lán)色葡聚糖及維生素B12溶液1ml，加于已平衡的柱上，以0.2mol /L 氯化鈉溶液流洗，用部分收集器收集各組分，流速為10～12ml /小時(shí)，每管2～4ml，同時(shí)于206nm波長(zhǎng)下自動(dòng)監(jiān)測(cè)，記錄流洗液圖譜。第一峰為藍(lán)色葡聚糖峰，計(jì)算由加樣起至第一峰峰頂?shù)牧飨匆后w積，即為Vo。第二峰為維生素B12峰，計(jì)算由加樣起至第二峰峰頂?shù)牧飨匆后w積，即為Vi。
3.4 多糖抗原Kd值的測(cè)定
3.4.1 取約1ml樣品（含多糖抗原3～5mg，凍干樣品可用1.2項(xiàng)溶液溶解)。加于已標(biāo)定的瓊聚糖4B膠柱上，用0.2mol /L 氯化鈉溶液流洗，流洗液用量為柱床總體積的1.5倍，每管收集2～4ml，同時(shí)于206nm波長(zhǎng)下自動(dòng)監(jiān)測(cè)，記錄流洗液圖譜，由加樣起至多糖峰峰頂流洗體積為Ve，計(jì)算分配系數(shù)（Kd)。
Kd=Ve―Vo/Vi―Vo
3.4.2Kd≤0.5多糖抗原回收率的計(jì)算
用求積儀分別計(jì)算Kd值0.5以前組分峰的面積除以所有組分峰zxtf.net.cn/zhuyuan/的面積，即得Kd≤0.5多糖抗原回收率。
Kd≤0.5多糖回收率（%)=Kd0.5以前組分峰的面積/所有組分峰的總面積×100
注意：過柱操作在10～20℃下進(jìn)行。
