雛鵝出血性壞死性肝炎的確診方法有哪些?
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雛鵝出血性壞死性肝炎是一種新發(fā)現(xiàn)的鵝的病毒性傳染病。目前研究報(bào)道極少，未能被許多獸醫(yī)工作者及飼養(yǎng)者所認(rèn)識(shí)，尤其近10余年來(lái)增加不少新鵝病。因此病原分離鑒定顯得特別重要。(1)病毒分離①病料采集。用無(wú)菌手續(xù)采集數(shù)只患病瀕死或剛死亡雛鵝的肝臟、脾臟病料，放置于無(wú)菌的玻瓶?jī)鼋Y(jié)保存作為病毒分離材料。②病料處理。將肝、脾病料剪碎、磨細(xì)，用滅菌PBS或Hank's液做1：5～1：10稀釋，經(jīng)3 000轉(zhuǎn)／分，離心30分鐘，取上清液加入
青霉素、
鏈霉素各1 000單位，于37℃溫箱作用30分鐘，經(jīng)細(xì)菌檢驗(yàn)為陰性者作為病毒分離材料。③胚胎接種。將經(jīng)檢驗(yàn)的病料，可分離接種10日齡SPF雞胚、12日齡鵝胚、11日齡鴨胚、12～13日齡番鴨胚，每胚絨尿膜接種0.1毫升，置37～38℃孵化箱內(nèi)繼續(xù)孵化，每天照蛋數(shù)次，觀察10天。48小時(shí)內(nèi)死亡胚胎廢棄。大多于4～5天死亡，于4～8℃冰箱冷卻，收集絨尿液及絨尿膜'經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)及具有典型胚胎及膜病變者，于低溫保存作傳代及鑒定用。未死亡胚胎凍死，檢查胚胎及膜，有典型病變者于低溫保存作傳代用。④雛鵝接種。用患病鵝肝脾病料制備的病毒分離材料，或胚胎絨尿液做1：5稀釋，接種5只10日齡左右易感雛鵝，每鵝肌肉注射1.0毫升，或爪墊注射0.2毫升，觀察15天。一般于感染后5～6天開(kāi)始發(fā)病，死亡雛鵝需作細(xì)菌等檢驗(yàn)，并檢驗(yàn)其病理變化應(yīng)與自然病例相同。(2)中和試驗(yàn)①胚胎中和試驗(yàn)。胚胎絨尿液（雞胚、鴨胚、鵝胚)上清液分成2份，1份加入4倍量已知抗本病毒高免血清，另一份加入4倍量滅菌PBS或生理鹽水代替血清作為對(duì)照，混勻后置37℃溫箱作用30分鐘，每組接種4～6枚胚胎．每胚絨尿膜0.1毫升，觀察8天。血清組胚應(yīng)全部健活，胚體和膜均無(wú)病變，而對(duì)照組胚死亡，并具有特征性胚體和膜的病變。②細(xì)胞中和試驗(yàn)。4倍遞增稀釋的本病毒抗血清與等量200TCID50細(xì)胞病毒液混合，37℃作用2小時(shí)，每稀釋度感染6孔雞胚成纖維細(xì)胞。同時(shí)用同樣的方法分別加入小鵝瘟抗血清、番鴨細(xì)小病毒抗血清、禽流感H5、H9亞型抗血清、雞新城疫抗血清，作用后感染細(xì)胞，另設(shè)病毒對(duì)照。結(jié)果，除了本病毒特異抗血清組細(xì)胞無(wú)病變中和外，中和價(jià)為4-4，病毒對(duì)照組細(xì)胞均出現(xiàn)病變，不能中和本病毒。上述結(jié)果表明抗小鵝瘟血清、抗番鴨細(xì)小病毒血清、抗禽流感H5、H9亞型病毒血清、抗雞新城疫病毒血清均不能中和本病毒，無(wú)抗原關(guān)系。 (3)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)①瓊脂抗原制備。用分離毒株胚體和絨尿膜以及同種胚胎同日齡正常胚體和絨尿膜，分別剪細(xì)制成勻獎(jiǎng)，經(jīng)3次凍融后離心取上清液，再用氯仿抽提3次，將上清液濃縮作為瓊擴(kuò)診斷抗原和陰性抗原對(duì)照。②抗血清制備。用分離毒株胚胎絨尿液，經(jīng)多次免疫同種青年禽類制備抗血清，以及未免疫同種禽類血清對(duì)照組。③瓊脂板制備。以1%瓊脂糖、8%NaCl、7.2pH和7.5%甘氨酸配方，其沉淀線最清晰。④瓊擴(kuò)結(jié)果。瓊擴(kuò)方法和判定結(jié)果與小鵝瘟方法相問(wèn)。⑤瓊脂擴(kuò)散阻斷試驗(yàn)。各分二組，一組抗本病毒株血清，抗小鵝瘟血清、抗番鴨細(xì)小病毒血清，分別與等量200ELD50本病毒液混合，另一組加入等量非本病抗血清或健康禽類血清或生理鹽水作對(duì)照，混合后于37℃作用1小時(shí)，經(jīng)離心取上清液于本病毒株制備的瓊擴(kuò)抗原做瓊擴(kuò)試驗(yàn)。結(jié)果，抗本病毒血清與本病毒瓊擴(kuò)抗原為陰性，而對(duì)照組瓊擴(kuò)價(jià)為1：1 6。
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實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)
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實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)診斷
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