鵝副黏病毒病的確診方法是?
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實驗室診斷鵝副黏病毒病的診斷可以根據(jù)
流行病學、臨診癥狀和病理變化綜合診斷。確診必須用雞胚進行病毒分離，以及用血凝試驗和血凝抑制試驗、中和試驗、保護試驗等血清學方法進行鑒定。(1)病毒分離①病料采集與處理。分離病毒的病料應采自早期典型病變的病鵝或死鵝，病程較長的病鵝可能有并發(fā)癥，容易干擾病毒的分離。捕殺病鵝或死鵝應用無菌手續(xù)采取腦或肝臟、脾臟組織。將病料磨細，加入滅菌生理鹽水或滅菌PBS液制成1：5～1：10的懸液，經(jīng)3 000轉／分，離心30分鐘后吸取上清液，按每毫升加入
青霉素、
鏈霉素各1 000單位，混勻后置4～8℃冰箱中作用2～4小時，或37℃溫箱中作用30分鐘后取少許液體分別接種于普通瓊脂斜面、鮮血瓊脂斜面和厭氧肉湯培養(yǎng)基，于37℃培養(yǎng)觀察48小時，無菌生長，凍結保存作為病毒分離材料。也可將上清液經(jīng)濾器過濾后，按每毫升加入青霉素、鏈霉素各500單位，混勻后置37℃溫箱中作用30分鐘，作為病毒分離材料。②雞胚接種。用4～6枚10～11日齡SPF雞胚，或4～6枚未經(jīng)新城疫免疫雞群的雞胚，每胚絨尿腔接種上述分離材料0.2毫升。接種24小時后每天照蛋4次，連續(xù)5天，通常于接種后36～72小時內死亡。接種24小時以后死亡的雞胚，放置4℃的冰箱內，氣室向上，冷卻4～12小時。用無菌手續(xù)收獲絨尿液，并做無菌檢查。渾濁的絨尿液和有菌生長的絨尿液棄去不用。將澄清、無菌生長和雞胚病變典型的絨尿液放置低溫冰箱凍結保存供進一步鑒定。(2)病毒鑒定 毒株的鑒定最常用的方法是血凝試驗和血凝抑制試驗。①血凝試驗(HA)。將被檢的雞胚絨尿液病毒用生理鹽水按倍增方法稀釋成不同稀釋度，分別加入于8支小試管，每管0.5毫升或0. 25毫升。然后加入同等量的1%雞紅細胞懸液混勻后，置于20～30℃室溫中，15分鐘后檢查，每5分鐘觀察1次，觀察至60分鐘，判定結果。1%雞紅細胞系采取健康
雞血液。采血時需加入抗凝劑，以生理鹽水洗滌3～5次，每次以3 000轉／分，離心1 5分鐘，將血漿、白細胞等充分洗去，將沉積的紅細胞用生理鹽水稀釋成1%懸液。②血凝抑制試驗(HI)。用已知抗鵝副黏病毒血清做血凝抑制試驗，對雞胚的分離物做鑒定。先將已知抗鵝副黏病毒血清做以2為底數(shù)的對數(shù)稀釋，每個稀釋度分別加入兩排試管中，每管0. 25毫升。另設陰性血清對照管。第一排試管每管加入0. 25毫升含有4個凝集單位的被檢病毒液，第二排每管加入0. 25毫升含有4個凝集單位的已知鵝副黏病毒液�；靹蚝蠓胖�37℃溫箱作用20分鐘后加入1%雞紅細胞懸液，每管0.5毫升，混勻后置于20～30℃室溫中，15分鐘后每5分鐘觀察1次，觀察至60分鐘，判定結果。如已知抗血清對已知鵝副黏病毒的抑制價和被檢病毒的抑制價相近，而且都不被已知陰性血清所抑制，即可將被檢的病毒定為鵝副黏病毒。③微量血凝試驗。存微量凝集板上，從第1～第12孔或根據(jù)所需要的孔數(shù)，用定量針頭每孔加入0. 025毫升生理鹽水。用定量針頭吸取同等量的被檢的雞胚絨尿液加入第1孔，依次做倍量稀釋，至最后一個倍量孔，棄去余液。用定量針頭每孔加入0. 025毫升1%雞紅細胞懸液，并設用生理鹽水代替被檢病毒液的紅細胞對照，立即在微量振蕩器上混勻，置室溫中30分鐘左右判定結果。判定方法與試管法相同。④微量血凝抑制試驗。在微量凝集板上，兩排均從1-12孔或根據(jù)抗血清效價所需的孔數(shù)，用定量針頭在每孔加入0. 025毫升生理鹽水。往第1孔中分別加入已知抗鵝副黏病毒血清0. 025毫升，依次做倍量稀釋至最后1孔，棄去余液。第一排每孔加入含有4個凝集單位0. 025毫升被檢雞胚病毒液。第二排每孔加入含有4個凝集單位0. 025毫升已知鵝副黏病毒液。微量板在微量振蕩器上混勻，置室溫中30分鐘后用定量針頭每孔加入0. 025毫升1%雞紅細胞懸液，并設病毒液和雞紅細胞對照孔，在微量振蕩器上混勻，置室溫中30分鐘左右判定結果。判定方法與試管法相同。
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