雞傳染性貧血的診斷方法是什么?
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病原學(xué)檢查時(shí)，可采集病
雞肝臟、脾臟或血液，制成勻漿，離心取上清液，70℃加熱5分鐘或用氯仿處理以去除或滅活可能的污染物，接種于馬立克病病毒轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞系MDCC-MSBI細(xì)胞培養(yǎng)，觀察細(xì)胞病變。如細(xì)胞體積增大溶解死亡，培養(yǎng)液呈紅色，可判為CIAV陽(yáng)性。也可取病料經(jīng)絨毛尿囊膜、卵黃膜接種于5~10日齡雞胚中，雛雞出殼后7日齡出現(xiàn)貧血，并于10~15日內(nèi)死亡，即為CIAV陽(yáng)性。血清學(xué)檢測(cè)可用間接熒光抗體試驗(yàn)和中和試驗(yàn)。在進(jìn)行間接免疫熒光試驗(yàn)時(shí)，可將107個(gè)MDCC-MSBI細(xì)胞懸浮于2毫升雞傳染性貧血病毒內(nèi)，37℃作用1小時(shí)后加8毫升培養(yǎng)液，培養(yǎng)24小時(shí)，取細(xì)胞培養(yǎng)懸液以1 000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘，棄去上清，取50微升上清和沉淀的細(xì)胞混合，吸取10~20微升滴加于載玻片上，制成直徑5毫米的細(xì)胞薄層，風(fēng)干后用冷丙酮固定10分鐘，保存在零下20℃。以
雞血清作為第一抗體，標(biāo)記熒光素的
兔抗雞IgG作為第二抗體，37℃水浴染色30分鐘。間接免疫熒光檢出耐過(guò)雞血清為1∶320左右，檢查時(shí)，接種后12小時(shí)即可在細(xì)胞核內(nèi)見到熒光顆粒。用雛雞作中和試驗(yàn)時(shí)，可將待檢血清進(jìn)行5倍稀釋，56℃滅活30分鐘，與等量的可使50%雛雞發(fā)病的有效劑量的雞傳染性貧血病毒混合，37℃作用1小時(shí)后肌肉注射5只1日齡雛雞，每只0.1毫升，接種后觀察14天，當(dāng)有3只被接種雞健存時(shí)判為抗體陽(yáng)性，2只或1只健存時(shí)判為可疑，全部發(fā)病時(shí)判為陰性。
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