雛番鴨小鵝瘟如何進行實驗室診斷?
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(1)免疫焚光抗體檢査無菌采集病鴨的肝、脾、腎、腦, 將病料按常規(guī)用冰凍切片機切成5微米厚的組織片,貼于載 玻片上,干燥后用丙酮固定12分鐘,將載玻片放入37°C水浴 箱中的染色架上,在組織切片上滴加熒光抗體,染色30分鐘 取出。先用0. 01摩爾/升磷酸鹽緩沖液(PBS,pH值8. 0)水 洗20分鐘,再用蒸餾水水洗3次,每次10分鐘,干燥后用熒光顯微鏡鏡檢。在放大200倍的視野中,可見切片上黑色的 胞核中或其邊緣有一個或數(shù)個針尖大小的清晰明亮黃綠色特 異熒光,而核以外的組織則為黃紅色或紅色。(2) 病毒分離鑒定① 病料的處理無菌采集病死鴨的肝臟、脾臟,剪碎研 磨,用滅菌生理鹽水制成懸液,比例為1 : 5,經(jīng)3 000轉(zhuǎn)/分離 心30分鐘,吸取上清液,每毫升加人
青霉素、
鏈霉素各1 000 國際單位處理,置于冰箱內(nèi)凍結(jié)保存,作病毒分離的接種材 料。② 病毒分離取以上處理好的病料,接種于12?15日齡 的鵝胚絨毛尿襄腔內(nèi),每鵝胚接種0.5毫升,置于37°C的溫 箱孵育。每天照蛋,及時收集48?72小時死亡的鵝胚,置于 4°C?8°C的冰箱中冷凍4小時后,無菌收集上清的尿囊液,過 濾細菌,保存。剖檢死鵝胚,可見絨毛尿囊腔
水腫,全身皮膚 充血、出血和水腫,即可確診。③ 動物回歸試驗試驗組:取上述病料的上清液和按 1 : 10稀釋的鵝胚絨毛尿襄液,分別接種7?10日齡的雛鵝 各5只(或5?10日齡的雛番鴨),0? 2毫升/只?瞻讓φ战M:取無菌生理鹽水肌注7?10日齡的雛鵝5 只(或5?10日齡的雛番鴨),0.2毫升/只。試驗組與對照組 隔離詞養(yǎng)。如果試驗組雛鵝(雛番鴨)發(fā)病死亡,且其臨床癥狀和剖 檢病理變化與鴨小鵝瘟自然發(fā)病的病鴨相似,而對照組的雛 鵝(雛番鴨)不出現(xiàn)任何癥狀,即可確診為小鵝瘟。(3) 血清學(xué)診斷①動物保護試驗試驗組:取抗小鵝瘟高免血清肌注5日齡左右的雛鵝5只(或5日齡左右的雛番鴨),1. 5?2毫升/只。6小時后注射 上法收集的按1 : 10稀釋的鵝胚絨毛尿囊液,〇. 1毫升/只。對照組:取無菌生理鹽水肌注5日齡左右的雛鵝5只(或 5日齡左右的雛番鴨),6小時后用病毒分離收集的鵝胚絨毛 尿囊液,按1 : 10比例稀釋后注射,〇. 1毫升/只。如果試驗組雛鵝(雛番鴨)80%以上得到保護,而對照組 80%以上發(fā)病死亡,且其臨床癥狀和剖檢病理變化與鴨小鵝 瘟自然發(fā)病的病鴨相似,即可確診為小鵝瘟。鴨小鵝瘟血清學(xué)診斷方法還有中和試驗、瓊脂擴散試驗、 ELISA 等。
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