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豬源支氣管敗血波氏桿菌的分離鑒定
豬源支氣管敗血波氏桿菌(Bordetella bronchiseptica，Bb)是豬傳染性萎縮性鼻炎(Swine infectious atrophicrhinitis of Swine，簡(jiǎn)稱AR)的主要病原菌，單獨(dú)或與產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌混合感染可引起豬的非進(jìn)行性及進(jìn)行性萎縮性鼻炎。該病在世界范圍內(nèi)存在，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
1、病原特征
支氣管敗血波氏桿菌屬于波氏桿菌屬細(xì)菌，是一種無芽孢、單在或成對(duì)排列的革蘭氏陰性球狀桿菌，常呈兩極著色，其大小為0．2～0．3μm×0．5～1．0μm。同時(shí)是一種嚴(yán)格需氧、非氧化非發(fā)酵型細(xì)菌。根據(jù)毒力、生長(zhǎng)特性和抗原性，該菌可分為3個(gè)菌相，I相菌的病原性最強(qiáng)，有莢膜和密集周生菌毛。本文來源于豬場(chǎng)動(dòng)力網(wǎng)www.powerpigs.net。II相菌和III相菌無莢膜和菌毛，毒力較弱。在實(shí)驗(yàn)傳代過程中，細(xì)菌易發(fā)生菌相變異，由I相菌變成II相菌和III相菌，II相菌是I相菌和III相菌之間的過渡菌型。
Bb固著在鼻腔黏膜上皮細(xì)胞上增殖，其壞死毒素引起鼻腔上皮發(fā)炎醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站zxtf.net.cn、增生和退變導(dǎo)致黏膜受損，給產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌(toxigenic Pasteurella multocida，TPm)寄居和增殖創(chuàng)造了條件。除引起豬鼻甲骨萎縮外，還可引起豬的支氣管性肺炎。Bb除感染豬外，還可感染家兔、豚鼠、馬、大鼠、狗、貓等多種哺乳動(dòng)物，偶爾感染人，引起慢性呼吸系統(tǒng)疾病或支氣管肺炎。
2 、Bb的分離鑒定
Bb的分離及鑒定方法包括病原學(xué)方法、血清學(xué)方法和分子生物學(xué)方法3種。雖然細(xì)菌分離鑒定是病原學(xué)方法中最基礎(chǔ)、最傳統(tǒng)的方法，由于鼻腔中其他常在菌的干擾，同時(shí)該菌在培養(yǎng)過程中容易發(fā)生菌相變異，實(shí)際工作中Bb的分離培養(yǎng)十分困難。
2．1病原學(xué)方法
2．1．1 Bb的分離培養(yǎng)
對(duì)表現(xiàn)萎縮性鼻炎臨床癥狀的豬，消毒豬鼻盤后，用棉拭子采集豬鼻腔內(nèi)黏性分泌物，將棉試子樣本保存在4～8℃的非營(yíng)養(yǎng)性轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中。對(duì)剖檢發(fā)現(xiàn)有肺部病變的豬，無菌取肺組織樣本，保存在4～8℃條件下盡快轉(zhuǎn)運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室。Bb在各種普通培養(yǎng)基中均易生長(zhǎng)，如常用的商業(yè)化培養(yǎng)基胰蛋白酶大豆瓊脂(tryptic soy agar，TSA)、麥康凱瓊脂、鮑一姜(Bordet-Gengou)氏培養(yǎng)基等，但容易發(fā)生菌相變異。通常用來培養(yǎng)I相菌的條件為：在鮑一姜氏基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入5％～l0％的血液或裂解紅血球液及優(yōu)質(zhì)混合蛋白胨，并在無凝集水的潮濕空氣中37℃培養(yǎng)24～48 h。典型的Bb I相菌呈圓形、高度凸起、光滑、直徑小于l mm、半透明、邊緣整齊，強(qiáng)黏性的菌落，而菌相變異菌呈扁平或低凸起、粗糙、直徑大于1 mm、透明、邊緣不整齊，無或弱黏性的菌落；在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上I相菌呈0溶血，而菌相變異菌呈y溶血。同時(shí)，Bb I相菌在1％葡萄糖改良麥康凱平板菌落不變紅，可生長(zhǎng)出一種圓形光滑、閃光隆起、透明略呈茶色或茶黃色的菌落。但該方法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便缺點(diǎn)是培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)豐富，無抗菌劑，易受常在菌污染。
蘇雄等利用自行設(shè)計(jì)的雙層平板選擇培養(yǎng)基并用雙溫培養(yǎng)法分離豬Bb。用加有l(wèi)％葡萄糖的麥康凱瓊脂作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，病料接種后在37℃培養(yǎng)一段時(shí)間，再在該培養(yǎng)過的基礎(chǔ)平板上傾注一層半固體培養(yǎng)基，置25℃培養(yǎng)14～16 h，其后在培養(yǎng)基表面挑選單個(gè)的菌落進(jìn)行驗(yàn)證。該方法的優(yōu)點(diǎn)是能抑制其他污染雜菌和真菌的生長(zhǎng)，不需要抗菌劑，但培養(yǎng)基配置和培養(yǎng)繁瑣，在臨床上很難推廣。
楊佩瓊比較了改良Smith培養(yǎng)基、l％葡萄糖麥康凱培養(yǎng)基和呋喃西林麥康凱培養(yǎng)基對(duì)Bb作分離效果，發(fā)現(xiàn)改良的Smith培養(yǎng)基的分離培養(yǎng)效果最理想，能很好地抑制鼻腔中其他細(xì)菌的生長(zhǎng)，并使培養(yǎng)基pH改變導(dǎo)致顏色變化，出現(xiàn)淺藍(lán)綠色、邊緣有光澤、易于識(shí)別的菌落。
