| 公開(公告)號 | CN101078009A |
| 公開(公告)日 | 2007.11.28 |
| 申請(專利)號 | CN200610044594.1 |
| 申請日期 | 2006.05.25 |
| 專利名稱 | 一種從矛頭蝮蛇毒中提取單一成份巴曲酶的方法 |
| 主分類號 | C12N9/68(2006.01)I |
| 分類號 | C12N9/68(2006.01)I;C12N9/74(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 齊魯制藥有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 劉祿娟;張潤平;于 萍;張明會;王晶翼 |
| 地址 | 250100山東省濟南市歷城區(qū)工業(yè)北路243號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 濟南舜源專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 苗 峻 |
| 國省代碼 | 山東;37 |
| 主權(quán)項 | 從矛頭蝮蛇的兩個亞種(Bothrops moojeni或Bothrops atrox)蛇毒中提取單一成份巴曲酶的方法，步驟包括： (1)蛇毒用緩沖液I浸泡、溶解過夜，然后離心去除沉淀，得上清液； (2)蛇毒上清液上親和層析柱，用緩沖液I進行洗脫，至蛋白檢測儀讀數(shù)達到基線，再用緩沖液II洗脫，核酸蛋白檢測儀檢測樣品峰，收集得巴曲酶粗提液； (3)巴曲酶粗提液直接流經(jīng)葡聚糖凝膠G25(Sephadex G25)脫鹽柱，去除苯甲脒鹽酸鹽(Benzamidine·HCL)； (4)去除苯甲脒鹽酸鹽的巴曲酶粗提液用透析膜或超濾裝置或脫鹽柱更換緩沖液III； (5)巴曲酶粗提液上經(jīng)緩沖液III平衡的陽離子交換層析柱，使用NaCl離子強度梯度緩沖液或pH梯度緩沖液洗脫，核酸蛋白檢測儀檢測樣品峰，收集樣品溶液； (6)樣品溶液經(jīng)聚乙二醇20000(PEG20000)包埋濃縮，或經(jīng)超濾濃縮，經(jīng)分子篩層析柱，用緩沖液IV洗脫，即得單一組份巴曲酶。 在上述步驟中，緩沖液I是pH6.0～10.0含0.1～2.0M NaCL的Tris-HCL緩沖液或甘氨酸-NaOH緩沖液或磷酸鹽(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉)緩沖液； 緩沖液II是pH6.0～10.0含0.1～0.5M NaCL和0.1～0.5M苯甲脒鹽酸鹽(Benzamidine·HCL)的Tris-HCL緩沖液或甘氨酸-NaOH緩沖液或磷酸鹽緩沖液； 緩沖液III是pH5.0～6.5、濃度為0.001～0.05M的磷酸鹽緩沖液或乙酸鹽(乙酸鈉-乙酸)緩沖液或枸櫞酸鹽(枸櫞酸鈉-枸櫞酸)緩沖液或Tris-HCL緩沖液； 緩沖液IV是pH4.0～8.0含0.01～0.5M NaCL的檸檬酸鹽緩沖液或Tris-HCL緩沖液或磷酸鹽緩沖液或乙酸鹽緩沖液； 步驟(2)中所述親和層析柱是指苯甲脒瓊脂糖凝膠6B(Benzamidine Sepharose 6B)或苯甲脒瓊脂糖凝膠4B(Benzamidine Sepharose 4B)層析柱； 步驟(5)中所述的陽離子交換層析柱是指磺丙基瓊脂糖凝膠(SP Sepharose)、甲基磺酸鹽瓊脂糖凝膠(S Sepharose)或羧甲基瓊脂糖凝膠(CM Sepharose)層析柱； 步驟(6)中所述的分子篩層析柱是丙烯葡聚糖凝膠S200(Sephacryl S200)或丙烯葡聚糖凝膠S100(Sephacryl S100)或Superdex-75層析柱。 |
| 摘要 | 一種從蛇毒中提取具有降纖溶栓作用或止血作用的巴曲酶的方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。步驟包括如下：蛇毒經(jīng)浸泡溶解、離心；上清液經(jīng)親和柱層析；洗脫液直接流經(jīng)葡聚糖凝膠G25脫鹽層析；含有效成份的洗脫液經(jīng)包埋、濃縮；濃縮樣品再經(jīng)分子篩層析，即可得到單一成份的巴曲酶。本方法具有適合規(guī)模化生產(chǎn)、操作簡便、生產(chǎn)周期短、產(chǎn)品純度高等特點。 |
| 國際公布 |
