| 公開(公告)號 | CN1117160C |
| 公開(公告)日 | 2003.08.06 |
| 申請(專利)號 | CN96198949.1 |
| 申請日期 | 1996.11.28 |
| 專利名稱 | 通過高細胞密度發(fā)酵在大腸桿菌中制備重組蛋白質的方法 |
| 主分類號 | C12P21/02 |
| 分類號 | C12P21/02;C12N15/72;C12N1/21;C07K16/28;//(C12N1/21,C12R1:19) |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | 1995.12.11 EP 95119478.6 |
| 申請(專利權)人 | 默克專利股份有限公司 |
| 發(fā)明(設計)人 | W·斯特里特馬特;S·馬特茲庫;D·里森伯格;U·霍恩;U·克努非爾;M·庫加;R·溫德斯;A·普魯克圖恩;A·克里博 |
| 地址 | 聯(lián)邦德國達姆施塔特 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | PCT/EP96/05260 1996.11.28 |
| 進入國家日期 | 1998.06.11 |
| 專利代理機構 | 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 |
| 代理人 | 陳文平 |
| 國省代碼 | 德國;DE |
| 主權項 | 借助有分批發(fā)酵和分批補料階段的高細胞密度發(fā)酵，在已用攜帶外來基因和可誘導啟動子的質粒轉化的大腸桿菌細胞中制備外源蛋白質的方法，其中沒有底物或代謝副產物對生長的限制，并從培養(yǎng)基中分離和純化所表達的蛋白質，使用連續(xù)的、自動或半自動分析法及加料系統(tǒng)控制分批補料期的底物濃度，其特征在于在分批補料期中，(i)培養(yǎng)基中碳源的濃度保持恒定在0.1g/L至25g/L范圍內，同時維持細胞不受限制的生長即μ＝μmax，(ii)當細胞密度為10至80g/L時經誘導啟動子在所說的分批補料期中開始外源蛋白質的產生，和(iii)在已誘發(fā)產物合成后，持續(xù)地供入可利用的氮和磷酸鹽，以及微量元素的鹽，及(iv)在整個分批補料期內，經以適當方式向發(fā)酵液內通入氧氣而將pO2調整到5至25％。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及用大腸桿菌的宿主-載體系統(tǒng)有效地生成重組蛋白質，特別是重組抗體分子，最好是抗體片段如小抗體的補料分批發(fā)酵方法。在給定的條件下，大腸桿菌細胞能夠以最大比生長速度生長至非常高的細胞密度。當重組產物生成開始時，只有所生成的產物以限制方式作用于生長。不發(fā)生因底物或代謝副產物造成的生長限制。因此，能在特定空間和時間內大量產生重組蛋白質。 |
| 國際公布 | WO97/21829 德 1997.6.19 |
