| 公開(公告)號 | CN1475573A |
| 公開(公告)日 | 2004.02.18 |
| 申請(專利)號 | CN02125762.0 |
| 申請日期 | 2002.08.16 |
| 專利名稱 | 利用RNA干擾現(xiàn)象介導(dǎo)功能基因下調(diào)的腺相關(guān)病毒載體 |
| 主分類號 | C12N15/63 |
| 分類號 | C12N15/63;C12N15/52;C12N15/86;C12N7/01 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 本元正陽基因技術(shù)股份有限公司;病毒基因工程國家重點實驗室 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 吳小兵;馬鑫;魯曉春;侯云德 |
| 地址 | 100176北京市北京經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)永昌中路6號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 應(yīng)用AAV載體質(zhì)粒pSNAV構(gòu)建攜帶有RNAi核苷酸轉(zhuǎn)錄單元重組質(zhì)粒； |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及用質(zhì)粒攜帶RNAi核苷酸片段，將攜帶RNAi的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)或動物體內(nèi)，從而使質(zhì)粒能在細(xì)胞內(nèi)或動物體內(nèi)源源不斷地復(fù)制RNAi核苷酸片段，來達(dá)到RNAi核苷酸片段應(yīng)起到的生物學(xué)作用。另外，該RNAi核苷酸片段也被包裝成為一種攜帶了RNAi核苷酸片段的重組腺相關(guān)病毒載體，通過腺相關(guān)病毒載體進(jìn)行RNAi核苷酸片段的基因轉(zhuǎn)移和復(fù)制，來達(dá)到RNAi核苷酸片段應(yīng)起到的生物學(xué)作用。在本發(fā)明中，構(gòu)建了一個短發(fā)夾環(huán)表達(dá)質(zhì)粒在BHK-21細(xì)胞中抑制熒光素酶的表達(dá)。具體方法是從人基因組DNA中設(shè)計引物用PCR調(diào)出人U6 snRNA啟動子，與被9bp序列間隔的21bp熒光素酶靶序列的反向重復(fù)，以及AAV載體質(zhì)粒pSNAV相連接，構(gòu)建成熒光素酶RNAi表達(dá)質(zhì)粒pSNAV/U6/Luc。與pMAMneoLuc質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞，以及單獨轉(zhuǎn)染熒光素酶細(xì)胞株，分別檢測對熒光素酶表達(dá)的抑制效果。實驗結(jié)果顯示pSNAV/U6/Luc對共轉(zhuǎn)染的pMAMneoLuc中熒光素酶的表達(dá)抑制50％，而對熒光素酶細(xì)胞株中熒光素酶的表達(dá)抑制70％。抑制實驗證實體內(nèi)轉(zhuǎn)錄出的短發(fā)夾環(huán)熒光素酶能夠有效抑制其在BHK-21細(xì)胞中的表達(dá)。 |
| 國際公布 |
