| 公開(公告)號 | CN1158388C |
| 公開(公告)日 | 2004.07.21 |
| 申請(專利)號 | CN01131736.1 |
| 申請日期 | 2001.09.29 |
| 專利名稱 | 連續(xù)灌流式培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞制備抗體的方法 |
| 主分類號 | C12P21/00 |
| 分類號 | C12P21/00;C12N5/12 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 陳志南 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 米力;李玲;馮強(qiáng);余曉玲 |
| 地址 | 陜西省西安市雁塔路11號南段專利中心毛淑霞轉(zhuǎn) |
| 頒證日 | 2004.07.21 |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 西安文盛專利代理有限公司 |
| 代理人 | 毛淑霞 |
| 國省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項 | 一種連續(xù)灌流式培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞制備抗體的方法，它主要由接種細(xì)胞-連續(xù)灌流培養(yǎng)-檢測方法-細(xì)胞代謝、生長速率、產(chǎn)物合成平衡調(diào)控分析一產(chǎn)物回收純化過程完成，其特征是接種細(xì)胞是采用固定床填充巨載體，接種細(xì)胞密度應(yīng)大于2-3×105/ml；細(xì)胞代謝、生長速率、產(chǎn)物合成平衡調(diào)控是通過在線監(jiān)測葡萄糖、乳酸、谷氨酸、谷氨酰胺、耗氧速率OUR以及pH值指標(biāo)獲得，同時監(jiān)測細(xì)胞比生長速率、抗體比生成速率及氨基酸消耗量，在細(xì)胞由對數(shù)生長期進(jìn)入衰退期之前，即主要指標(biāo)是ΔOUR＜0.1mmol/l/h，葡萄糖消耗大于50％，添加相應(yīng)的氨基酸，并降低葡萄糖和血清濃度，以及控制灌流量，使細(xì)胞由以生長代謝為主轉(zhuǎn)為以產(chǎn)物合成為主，進(jìn)入穩(wěn)態(tài)培養(yǎng)，其中，添加的相應(yīng)氨基酸包括必需氨基酸和非必需氨基酸，添加氨基酸的量由相應(yīng)細(xì)胞和產(chǎn)物所消耗氨基酸的量而補(bǔ)加，降低葡萄糖和血清的濃度采用逐漸遞減方式，使其進(jìn)入穩(wěn)態(tài)培養(yǎng)的指標(biāo)，即乳酸生成速率與葡萄糖消耗速率比值保持較低水平，保證細(xì)胞比生長速率μ相對恒定；產(chǎn)物回收純是采用Streamline SP介質(zhì)，一步回收培養(yǎng)上清中的抗體，DEAE-Sepharose FF陰離子交換劑去除純化后抗體產(chǎn)品中的熱源質(zhì)，抗體成品凍干保存。 |
| 摘要 | 該連續(xù)灌流式培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞制備抗體的方法，由接種細(xì)胞—連續(xù)灌流培養(yǎng)—檢測方法—細(xì)胞代謝、生長速率、產(chǎn)物合成平衡調(diào)控分析—產(chǎn)物回收純化過程完成，接種細(xì)胞是采用固定床填充巨載體，細(xì)胞代謝、生長速率、產(chǎn)物合成平衡調(diào)控是對葡萄糖、乳酸---以及pH值等指標(biāo)進(jìn)行分析，在細(xì)胞由對數(shù)生長期進(jìn)入衰退期之前，添加相應(yīng)的氨基酸，并降低葡萄糖和血清濃度，細(xì)胞由以生長代謝為主轉(zhuǎn)為以產(chǎn)物合成為主，進(jìn)入穩(wěn)態(tài)培養(yǎng)，此方法反復(fù)應(yīng)用，實現(xiàn)多個穩(wěn)態(tài)，達(dá)到高密度、高產(chǎn)量的長期培養(yǎng)；產(chǎn)物回收純化是采用Streamline SP介質(zhì)，一步回收培養(yǎng)上清中的抗體，DEAE-Sepharose FF陰離子交換劑去除純化后抗體產(chǎn)品中的熱源質(zhì)，成品凍干。 |
| 國際公布 |
