公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN1536076A
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公開(kāi)(公告)日
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2004.10.13
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN03109287.X
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申請(qǐng)日期
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2003.04.09
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專利名稱
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成年人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增和定向誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的方法
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主分類號(hào)
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C12N5/08
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分類號(hào)
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C12N5/08
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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裴雪濤;牛麗麗;曹豐;賈國(guó)良;祝善俊
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地址
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100850北京市海淀區(qū)太平路27號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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代理人
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國(guó)省代碼
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北京;11
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主權(quán)項(xiàng)
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一種分離擴(kuò)增培養(yǎng)成年人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymalstemcells,MSCs)的方法,其特征在于利用干細(xì)胞生理特性,采用DMEM-F12+10%胎牛血清作為基本培養(yǎng)基,通過(guò)及時(shí)、反復(fù)傳代對(duì)人MSCs進(jìn)行純化和擴(kuò)增培養(yǎng),從而獲得高純度大量MSCs的目的。
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摘要
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本發(fā)明的目的是提供一種將人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)大量擴(kuò)增后體外定向誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:1)利用MSCs的生物學(xué)特性,采用密度梯度離心法分離富集人MSCs,利用干細(xì)胞的自我更新和增殖特性對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增,從而達(dá)到獲得大量干細(xì)胞的目的。2)分離出的細(xì)胞在體外進(jìn)行定向誘導(dǎo)分化的方案,其特征在于特定培養(yǎng)代數(shù)(第2-6,11代細(xì)胞)進(jìn)行誘導(dǎo),以特定的化學(xué)誘導(dǎo)劑5-氮胞苷(5-AZA),特定濃度(5-10μM)進(jìn)行定向誘導(dǎo);3)分離出的細(xì)胞在體外進(jìn)行定向誘導(dǎo)分化的方案,其特征還在于bFGF促細(xì)胞增殖及促進(jìn)肌細(xì)胞表型表達(dá)功能與5-AZA的去甲基化作用結(jié)合,更有助于人MSCs向成心肌細(xì)胞定向分化。本發(fā)明提供了心肌細(xì)胞損傷缺失后的補(bǔ)充來(lái)源,為干細(xì)胞移植替代臨床治療心肌梗死及晚期心功能不全等奠定了基礎(chǔ),并為心肌梗死及晚期心功能不全等心肌疾病的藥物篩選提供了一個(gè)新的模型。
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國(guó)際公布
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