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具有綠色熒光蛋白示蹤和抗性篩選標(biāo)記的RNAi載體pGO

公開(公告)號(hào) CN1539979A  
公開(公告)日 2004.10.27  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200310108141.7  
申請(qǐng)日期 2003.10.24  
專利名稱 具有綠色熒光蛋白示蹤和抗性篩選標(biāo)記的RNAi載體pGO  
主分類號(hào) C12N15/63  
分類號(hào) C12N15/63;C12N15/79;A61K48/00;A61P35/00  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 王紅陽;鄢和新;張瑞;陳磊;吳孟超  
地址 200433上海市楊浦區(qū)翔殷路800號(hào)  
頒證日  
國際申請(qǐng)  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 上海新天專利代理有限公司  
代理人 丁振英  
國省代碼 上海;31  
主權(quán)項(xiàng) 一種RNAi載體pGO,包括pUC復(fù)制起點(diǎn)pUCori、fl復(fù)制起點(diǎn)flori、細(xì)菌啟動(dòng)子P、卡那霉素基因Kan、HSV-TKPolyA、U6啟動(dòng)子U6promoter和多克隆位點(diǎn)MCS,其特征在于還含有用于表達(dá)綠色熒光蛋白基因的轉(zhuǎn)錄元件,包括CMV啟動(dòng)子CMVpromoter、增強(qiáng)綠色熒光蛋白基因EGFP和SV40PolyA,以及用于表達(dá)真核細(xì)胞抗性篩選標(biāo)志的新霉素基因轉(zhuǎn)錄元件,包括SV40早期啟動(dòng)子SV40epromoter和新霉素抗性基因Neo。  
摘要 本發(fā)明涉及醫(yī)藥分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域,是一種可用于特異性抑制靶基因表達(dá)的具有綠色熒光蛋白示蹤和真核細(xì)胞抗性篩選標(biāo)記的RNA干擾(RNAi)載體pGO。本發(fā)明RNAi載體pGO是對(duì)pEGFP-C2載體的改造,去除了其原有的多克隆位點(diǎn),在SV40 polyA和fl原核復(fù)制起點(diǎn)之間插入帶有相應(yīng)多克隆位點(diǎn)的U6啟動(dòng)子構(gòu)成。只要在U6啟動(dòng)子下游的多克隆位點(diǎn)中的適當(dāng)位點(diǎn)插入針對(duì)靶基因的siRNA模板,轉(zhuǎn)染細(xì)胞后就可特異并有效地抑制該基因的表達(dá)。因而本發(fā)明的RNAi載體pGO可用于制備研究基因功能的試劑或用于抗腫瘤藥物的研究和開發(fā)。  
國際公布  
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