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自體胸水上清培養(yǎng)TIL細(xì)胞的方法

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1560234A  
公開(kāi)(公告)日 2005.01.05  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200410014095.9  
申請(qǐng)日期 2004.02.18  
專利名稱 自體胸水上清培養(yǎng)TIL細(xì)胞的方法  
主分類號(hào) C12N5/08  
分類號(hào) C12N5/08  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 劉寶瑞;鄒征云  
地址 210008江蘇省南京市中山路321號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 南京蘇科專利代理有限責(zé)任公司  
代理人  
國(guó)省代碼 江蘇;32  
主權(quán)項(xiàng) 自體胸水上清培養(yǎng)TIL細(xì)胞的方法,無(wú)菌收集癌性胸水,離心后保存上清,用淋巴細(xì)胞分離液分離下層細(xì)胞,去除下層細(xì)胞中的紅細(xì)胞、壞死組織碎片,其特征在于(1)將上清留作培養(yǎng)基;(2)取下層細(xì)胞中的白膜層細(xì)胞至上清培養(yǎng)基培養(yǎng);(3)12~24小時(shí)后,腫瘤細(xì)胞全部貼壁,懸浮的是TIL細(xì)胞;(4)將濃度在5×105/ml~1×106/ml的TIL細(xì)胞置于飽和濕度、5%二化碳孵箱內(nèi)培養(yǎng),溫度控制在37℃內(nèi);(5)1天后,加入終濃度50~100ng/ml的OKT3、800~6000U/ml的IL-2、50~100ug/ml的PHA;(6)隔1~2天,加入含800~6000U/ml的IL-2的完全培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。  
摘要 本發(fā)明涉及一種利用自體胸水上清進(jìn)行TIL細(xì)胞的培養(yǎng)方法。本發(fā)明采用將收集的癌性胸水離心后保存上清,用作培養(yǎng)基,將下層細(xì)胞中的白膜層細(xì)胞至該上清培養(yǎng)基中培養(yǎng),得懸浮的TIL細(xì)胞,再至孵箱內(nèi)培養(yǎng),1天后加入OKT3、IL-2、PHA等,1、2天再加入IL-2進(jìn)行培養(yǎng)。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明該方法是可行的,與現(xiàn)有方法相比,某些方面相同,某些方面更優(yōu)。而本發(fā)明卻避免了現(xiàn)有方法使用人AB血清可能導(dǎo)致的乙肝、愛(ài)滋病等傳染,體外培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)所增加的污染機(jī)率,以及培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)增加病人負(fù)擔(dān),延長(zhǎng)治療時(shí)間和成本增加等缺陷。  
國(guó)際公布  
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