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厭氧菌的一種快速檢測(cè)方法

公開(公告)號(hào) CN1184327C  
公開(公告)日 2005.01.12  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN02115903.3  
申請(qǐng)日期 2002.05.30  
專利名稱 菌的一種快速檢測(cè)方法  
主分類號(hào) C12Q1/04  
分類號(hào) C12Q1/04;C12Q1/37  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬梨園醫(yī)院  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 薛存寬;王模榮;蔣鵬;王玲  
地址 430077 湖北省武漢市徐東路梨園新村  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 武漢開元專利代理有限責(zé)任公司  
代理人 朱盛華  
國(guó)省代碼 湖北;42  
主權(quán)項(xiàng) 厭氧菌的一種快速檢測(cè)方法,其特征在于其具體步驟為:1)標(biāo)本的預(yù)處理:(1)液體標(biāo)本直接加飽和氯化鈉成飽和溶液后鹽析,(2)痰、膿粘稠標(biāo)本,加濃度為2~10%的鹽酸+次氯酸或酶震蕩消化數(shù)分鐘,充分溶解后,再加飽和氯化鈉鹽析,鹽酸∶次氯酸=1∶2~6,酶包括胰蛋白酶、糜蛋白酶、蛋白酶、菠蘿蛋白酶,(3)組織塊固體標(biāo)本,先剪碎研磨成勻漿,再加2~10%鹽酸+次氯酸或酶震蕩消化成溶液,后加飽和氯化鈉鹽析,酶包括胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、菠蘿蛋白酶,2)標(biāo)本的固相微萃。狠腿♂橆^采用有聚乙烯乙二醇/二乙烯苯、聚乙烯乙二醇/陰離子樹脂或聚二甲基硅氧烷/二乙烯苯復(fù)合涂層的針頭,萃取方式采用密封瓶離取樣液面1公分左右頂空萃取法,萃取1分鐘以上,或液中萃取5分鐘以上,3)相色譜分析:色譜柱——彈性石英毛細(xì)管色譜柱或填充柱,固定相為聚乙二醇20M和2-硝基對(duì)苯二甲酸的反應(yīng)物,簡(jiǎn)稱FFAP,載氣——N2,檢測(cè)器——?dú)浠鹧鏅z測(cè)器或熱導(dǎo)池類檢測(cè)器,汽化室溫度——200~250℃,脫附時(shí)間——5~10以上秒,柱溫——90~150℃下恒溫,為理想分離各成分峰,或在60~220℃分二階或多階程序升溫,靈敏度——102~3mV.mL/mg,輸出衰減倍數(shù)1/1~8,4)檢測(cè):采用定性檢測(cè),以明確、清晰檢出以下成分峰為陽(yáng)性,即有厭氧菌(1)明確、清晰檢出有異丁酸、戊酸、異戊酸峰中之一者,(2)明確、清晰檢出有乙酸、丙酸及另外一種短鏈脂肪酸峰中之一者,(3)明確、清晰檢出有二種非異丁酸、戊酸、異戊酸、乙酸、丙酸的短鏈脂肪峰者。  
摘要 厭氧菌的一種快速檢測(cè)方法,涉及一種厭氧菌感染的診斷方法。其具體步驟為:標(biāo)本的預(yù)處理,標(biāo)本的固相微萃取(SPME),氣相色譜分析,由檢測(cè)出的厭氧菌代謝產(chǎn)生的揮發(fā)性短鏈脂肪酸成分峰,診斷出厭氧菌的存在。采用本發(fā)明,標(biāo)本采集無(wú)特殊要求,標(biāo)本保送無(wú)特殊條件要求及時(shí)間限制,不需培養(yǎng),可以快速檢測(cè)出患者是否感染有厭氧菌,檢測(cè)時(shí)間僅需30~40分鐘。本發(fā)明不受正常寄居菌的影響,檢測(cè)陽(yáng)性率高,檢測(cè)可靠。不僅可用于厭氧菌的檢測(cè),而且可用于病情監(jiān)測(cè),對(duì)厭氧菌感染性疾病的診治有很高價(jià)值。  
國(guó)際公布  
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