| 公開(公告)號 | CN1219795C |
| 公開(公告)日 | 2005.09.21 |
| 申請(專利)號 | CN00111220.1 |
| 申請日期 | 2000.07.19 |
| 專利名稱 | 用新的復(fù)性方法制備重組人神經(jīng)生長因子 |
| 主分類號 | C07K14/48 |
| 分類號 | C07K14/48;A61K38/18;A61P25/00 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 深圳市海王英特龍生物技術(shù)股份有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 王革 |
| 地址 | 518054 廣東省深圳市南山區(qū)南油大道海王大廈24層 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 廣州市拓元專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 張少君 |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種通過二硫鍵異構(gòu)酶PDI催化復(fù)性制備重組人神經(jīng)生長因子rhNGF的方法，包括步驟①通過工程菌大腸桿菌表達(dá)rhNGF，②進(jìn)行菌體破碎，③通過離心分離包含體，④利用變性體系變性溶解，⑤PDI催化復(fù)性，⑥脫鹽以及⑦陽離子交換層析，其特征在于：步驟④的變性體系含有1-10M尿素，5-50mMTris，1-5mMEDTA，且pH7-10；步驟⑤中rhNGF與PDI的摩爾比為100∶1-10∶1；步驟⑦的交換層析采用CM-Sepharose陽離子交換柱，洗脫條件為O-1MNaCl，pH4-8。 |
| 摘要 | 一種通過二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)催化復(fù)性制備重組人神經(jīng)生長因子(rhNGF)的方法，包括步驟①通過工程菌大腸桿菌表達(dá)rhNGF，②進(jìn)行菌體破碎，③通過離心分離包含體，④利用變性體系變性溶解，變性體系含有1-10M尿素，5-50mM Tris，1-5mM EDTA，且pH 7-10；⑤PDI催化復(fù)性，rhNGF與PDI的摩爾比為100∶1-10∶1；⑥脫鹽以及⑦陽離子交換層析，采用CM-Sepharose陽離子交換柱，洗脫條件為0-1M NaCl，pH4-8。經(jīng)上述步驟，即可制備得到純度大于95％，具天然生物學(xué)活性的rhNGF。采用此方法降低了成本，并可應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。 |
| 國際公布 |
