| 公開(公告)號 | CN1687448A |
| 公開(公告)日 | 2005.10.26 |
| 申請(專利)號 | CN200510025259.2 |
| 申請日期 | 2005.04.21 |
| 專利名稱 | 用固定化α-葡萄糖苷酶模型篩選活性天然藥物的方法 |
| 主分類號 | C12Q1/18 |
| 分類號 | C12Q1/18;C12Q1/25 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 上海大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 雍克嵐;呂敬慈;盧大勝;陳 旭;顧慧娟 |
| 地址 | 200072上海市閘北區(qū)延長路149號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海上大專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 顧勇華 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 一種用固定化α-葡萄糖苷酶篩選模型篩選天然藥物的方法，其特征在于具有以下的過程和步驟：a.α-葡萄糖苷酶固定化：用三羥甲基磷為交聯(lián)劑，以殼聚糖作載體固定化α-葡萄糖苷酶。b.制作α-葡萄糖苷酶抑制劑篩選模型：將上述固定化α-葡萄糖苷酶裝入直徑為0.5～0cm。長度為5～10cm的層析柱中，柱中加入pH6.8的磷酸鉀緩沖液，于4℃保存，構(gòu)成篩選模型；c.模型有效性驗證：用具有代表性的α-葡萄糖苷酶抑制劑阿卡波糖進(jìn)行該篩選模型有效性驗證，將上述柱子下端緊密插入帶有活塞的小管，上端插入-注射器，將柱中的緩沖溶液壓到離柱頂下約0.3～0cm后，分別加入4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷和一定量的阿卡波糖溶液，輕輕震蕩使柱頂?shù)娜苋芑靹颍缓罄^續(xù)壓溶液至液面和柱頂相平，關(guān)上底端的活塞，再把該柱放入水浴槽，在37℃下溫育數(shù)分鐘，待反應(yīng)完畢，用磷酸鉀緩沖液沖洗柱內(nèi)，收集洗液，把洗脫液稀釋至5～20ml體積，用紫外分光光度計在400nm處測定吸光度值；并把上述的4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷、阿卡波糖溶液和緩沖液稀釋至相同體積作空白，按照所得反應(yīng)液的吸光度數(shù)據(jù)計算抑制劑阿卡波糖的抑制率；d.抑制率I(％)的計算：I(％)＝(ΔAE-ΔA)/ΔAE×100％；ΔAE＝未加抑制劑前固定化α-葡萄糖苷酶與4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷反應(yīng)后的吸光度值(扣除相應(yīng)空白)；ΔA＝加入抑制劑后固定化α-葡萄糖苷酶與4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷反應(yīng)后的吸光度值(扣除相應(yīng)空白)；C為抑制劑濃度，以C為橫坐標(biāo)，抑制率I％為縱坐標(biāo)，作抑制劑濃度C與相應(yīng)抑制率I％的回歸曲線，并于50％抑制率處得到半抑制率濃度IC50；e.篩選模型的應(yīng)用：參照上述驗證固定化α-葡萄糖苷酶抑制劑篩選模型的方法篩選天然藥物中藥虎仗和血竭，以IC50值作為判斷抑制活性指標(biāo)。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種用固定化α-葡萄糖苷酶模型篩選活性天然藥物的方法，屬新藥篩選化學(xué)工藝技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明方法的特征在于具有以下過程和步驟：首先將α-葡萄糖苷酶固定化，制作α-葡萄糖苷酶抑制劑篩選模型，用具有代表性的α-葡萄糖苷酶抑制劑阿卡波糖進(jìn)行該篩選模型有效性驗證；用固定化α-葡萄糖苷酶篩選模型篩選天然藥物中藥虎仗和血竭，其方法是將α-葡萄糖苷酶固定化，裝入層析柱中，柱中加入pH6.8的磷酸鉀緩沖液，構(gòu)成篩選模型，于4℃保存；篩選時加入4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷及需篩選的中藥虎仗或血竭，收集磷酸鉀緩沖液柱洗脫液，然后用紫外分光光度計在400nm處測定其吸光度值，通過計算公式得其抑制率，并作出抑制劑濃度與相應(yīng)抑制率的回歸曲線，并于50％抑制率處得到半抑制率濃度IC50，以IC50值作為判斷被篩選物質(zhì)抑制活性的依據(jù)。 |
| 國際公布 |
