網(wǎng)站首頁(yè)
醫(yī)師
藥師
護(hù)士
衛(wèi)生資格
高級(jí)職稱
住院醫(yī)師
畜牧獸醫(yī)
醫(yī)學(xué)考研
醫(yī)學(xué)論文
醫(yī)學(xué)會(huì)議
考試寶典
網(wǎng)校
論壇
招聘
最新更新
網(wǎng)站地圖
您現(xiàn)在的位置: 醫(yī)學(xué)全在線 >> 藥學(xué)理論 >> 中國(guó)藥品專(zhuān)利文獻(xiàn) >> 正文:分泌人白介素-2的重組卡介苗及其構(gòu)建方法專(zhuān)利檢索:專(zhuān)利號(hào)/專(zhuān)利人/發(fā)明人
    

分泌人白介素-2的重組卡介苗及其構(gòu)建方法

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1710072A  
公開(kāi)(公告)日 2005.12.21  
申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) CN200510025776.X  
申請(qǐng)日期 2005.05.12  
專(zhuān)利名稱 分泌人白介素-2的重組卡介苗及其構(gòu)建方法  
主分類(lèi)號(hào) C12N15/09  
分類(lèi)號(hào) C12N15/09;C12N15/63;C12N15/26;A61K38/20;A61K39/00;C12Q1/68;A61P35/00;A61P31/06  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 上海交通大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 夏術(shù)階;劉海濤;孫曉文;凡 杰;張沂南  
地址 200240上海市閔行區(qū)東川路800號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu) 上海交達(dá)專(zhuān)利事務(wù)所  
代理人 毛翠瑩  
國(guó)省代碼 上海;31  
主權(quán)項(xiàng) 一種分泌人白介素-2的重組卡介苗的構(gòu)建方法,其特征在于包括如下步驟:1)卡介苗穿梭表達(dá)載體的構(gòu)建:根據(jù)已有的卡介苗分泌抗原Ag85B信號(hào)肽和IL-2的基因序列,分別設(shè)計(jì)Ag85B信號(hào)肽和IL-2的擴(kuò)增引物,Ag85B信號(hào)肽的上下游酶切位點(diǎn)分別為BamHI和EcorI,IL-2的上下游酶切位點(diǎn)分別為EcorI和SalI,經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)分別合成得到Ag85B信號(hào)肽和IL-2的基因片段,將Ag85B信號(hào)肽克隆到pMV261載體中,得到pMS,再將IL-2基因片段與pMS載體的信號(hào)肽連接,得到卡介苗穿梭表達(dá)載體pMSIL-2;2)卡介苗的培養(yǎng):選取卡介苗為上海丹麥株,將卡介苗放在含有液體培養(yǎng)基的燒瓶中進(jìn)行搖床培養(yǎng),液體培養(yǎng)基含有10%的營(yíng)養(yǎng)劑ADC、0.5%吐溫80和0.2%甘油,搖床培養(yǎng)100轉(zhuǎn)/分,三周后卡介苗處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,OD600值=0.6,制得感受態(tài)卡介苗;3)電轉(zhuǎn)化技術(shù)構(gòu)建重組卡介苗rBCGIL-2:在一離心管中混勻400μl含1×108cfu的感受態(tài)卡介苗和2μl含0.4μg的穿梭表達(dá)載體pMSIL-2,置于基因脈沖儀中進(jìn)行電轉(zhuǎn)化得到陽(yáng)性重組子,電轉(zhuǎn)參數(shù):電壓為2500V,電流為25μF,電阻為1000Ω,陽(yáng)性重組子先在含有50μg/ml卡那霉素的固體培養(yǎng)基中篩選,培養(yǎng)兩周后得到陽(yáng)性克隆rBCGIL-2,然后接種在含有50μg/ml卡那霉素的液體培養(yǎng)基搖床生長(zhǎng),大量培養(yǎng);4)重組卡介苗rBCGIL-2的鑒定與功能檢測(cè):進(jìn)行抗酸染色初步確定rBCGIL-2為抗酸桿菌,抽提rBCGIL-2質(zhì)粒DNA后,PCR擴(kuò)增得到IL-2的基因片段,Westernblotting檢測(cè)到rBCGIL-2培養(yǎng)上清中和菌體中有IL-2蛋白的表達(dá),ELISA方法檢測(cè)到rBCGIL-2培養(yǎng)上清中有高含量的IL-2。  
摘要 本發(fā)明涉及一種分泌人白介素-2的重組卡介苗rBCGIL-2及其構(gòu)建方法,利用基因工程技術(shù)將起分泌作用的卡介苗Ag85B信號(hào)肽片段和人IL-2的基因克隆至pMV261,得到卡介苗穿梭表達(dá)載體pMSIL-2,然后采用電轉(zhuǎn)化技術(shù)將pMSIL-2導(dǎo)入BCG構(gòu)建重組卡介苗rBCGIL-2,依靠pMSIL-2在BCG的復(fù)制和信號(hào)肽的分泌作用,能夠高效分泌IL-2。本發(fā)明得到的重組卡介苗rBCGIL-2具有BCG和IL-2的雙重效果,能夠有效預(yù)防和治療淺表性膀胱腫瘤及結(jié)核病;利用重組卡介苗rBCGIL-2在膀胱腔內(nèi)的局部協(xié)同作用減少BCG和外用IL-2的用量,可以克服BCG治療的毒副作用。  
國(guó)際公布  
...
評(píng)論加載中...
網(wǎng) 名: (必填項(xiàng))
評(píng)論內(nèi)容:
關(guān)于我們 - 聯(lián)系我們 -版權(quán)申明 -誠(chéng)聘英才 - 網(wǎng)站地圖 - 醫(yī)學(xué)論壇 - 醫(yī)學(xué)博客 - 網(wǎng)絡(luò)課程 - 幫助
醫(yī)學(xué)全在線 版權(quán)所有© CopyRight 2006-2046, MED126.COM, All Rights Reserved
浙ICP備12017320號(hào)-1
百度大聯(lián)盟認(rèn)證綠色會(huì)員可信網(wǎng)站 中網(wǎng)驗(yàn)證