| 公開(公告)號(hào) | CN1712544A |
| 公開(公告)日 | 2005.12.28 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410047959.7 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.06.14 |
| 專利名稱 | SARS冠狀病毒RNA磁性捕獲方法及應(yīng)用該方法的PCR檢測(cè) |
| 主分類號(hào) | C12Q1/68 |
| 分類號(hào) | C12Q1/68 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 蔡劍平 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 蔡劍平;黑愛蓮 |
| 地址 | 100054北京市豐臺(tái)區(qū)草橋東路16-4022 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京德琦知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 王 琦;宋志強(qiáng) |
| 國(guó)省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種SARS冠狀病毒RNA的捕獲方法，該方法包括如下的步驟：1)清洗表面包被有親和素的磁珠，以清除RNA酶，防止RNA的降解；2)將捕獲探針P1在5’端用生物素進(jìn)行標(biāo)記；3)將清洗過的磁珠與適量經(jīng)標(biāo)記的捕獲探針P1混合，通過生物素和親和素的特異結(jié)合，使捕獲探針P1包被在磁珠表面，4℃保存；4)將標(biāo)本用TRIzolLS裂解；5)向步驟4)所得溶液中加入包被有捕獲探針P1的磁珠，使捕獲探針P1捕獲SARS冠狀病毒RNA；和6)用磁力架收集經(jīng)步驟5)的溶液中的磁珠，洗滌后，將其溶于適量的DEPC水中，-80℃保存；其中捕獲探針P1的序列為：5′-GTAGCCTGGTTAATGTGC-3’；所述標(biāo)本選自患者的血清、血漿、唾液、尿液、腦脊液或呼吸道分泌物中的一種。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供了一種SARS冠狀病毒RNA的捕獲方法。具體的是使用生物素標(biāo)記的捕獲探針與包被了親和素的磁珠結(jié)合，通過捕獲探針捕獲標(biāo)本中的靶RNA，再用磁力架收集，并洗滌。該捕獲方法可去除標(biāo)本中的蛋白質(zhì)、非靶RNA和抑制PCR的物質(zhì)，使靶RNA得到純化；該方法可同時(shí)對(duì)靶RNA進(jìn)行濃縮富集，起到提高靶RNA濃度的目的。此外，本發(fā)明還提供了一種雙探針捕獲方法。在用捕獲探針捕獲靶RNA前，用預(yù)雜交探針與樣本中的靶RNA進(jìn)行預(yù)雜交，打開靶RNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步提高捕獲效率。本發(fā)明還提供了一種SARS冠狀病毒RNA的RT-PCR檢測(cè)方法，該方法采用上述捕獲方法捕獲靶RNA，可大大提高檢測(cè)的敏感度，有利于對(duì)患者進(jìn)行早期診斷。 |
| 國(guó)際公布 |
