| 公開(公告)號 | CN1273585C |
| 公開(公告)日 | 2006.09.06 |
| 申請(專利)號 | CN200410089167.6 |
| 申請日期 | 2004.11.29 |
| 專利名稱 | 細胞色素 P450BM-3 單加氧酶變體基因及其用途 |
| 主分類號 | C12N9/02(2006.01)I |
| 分類號 | C12N9/02(2006.01)I;C12N15/53(2006.01)I;C12P17/10(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 浙江大學 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 梅樂和;李紅梅;姚善涇 |
| 地址 | 310027浙江省杭州市西湖區(qū)浙大路38號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 張法高 |
| 國省代碼 | 浙江;33 |
| 主權(quán)項 | 一種細胞色素P450BM-3單加氧酶變體基因，其特征在于：通過易錯PCR技術(shù)介導(dǎo)的隨機突變，篩選獲得的P450BM-3變體基因，該P450BM-3基因中的第168位的天冬氨酸的密碼子GAT突變?yōu)樘於０返拿艽a子AAT，第225位的丙氨酸的密碼子GCA突變?yōu)槔i氨酸的密碼子GTA，將第440位賴氨酸Lys的密碼子AAA突變?yōu)樘於０稟sn的密碼子AAT所得到的P450BM-3變體基因，該變體基因的核苷酸序列為SEQIDNo.1，并且編碼細胞色素P450BM-3的單加氧酶。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種細胞色素P450BM-3單加氧酶變體基因及其用途。它通過易錯PCR技術(shù)介導(dǎo)的隨機突變，篩選獲得的P450BM-3變體基因，該P450BM-3基因中的第168位的天冬氨酸的密碼子GAT突變?yōu)樘於０返拿艽a子AAT，第225位的丙氨酸的密碼子GCA突變?yōu)槔i氨酸的密碼子GTA，將第440位賴氨酸的密碼子AAA突變?yōu)樘於０访艽a子AAT所得到的P450BM-3變體基因(Asp168→Asn，Ala225→Val，Lys440→Asn)P450BM-3。該變體基因序列為SEQ ID No.1核苷酸序列，并且編碼細胞色素P450BM-3的單加氧酶。本發(fā)明創(chuàng)造了一種對吲哚具有更高催化活力的P450BM-3變體基因，該變體基因表達的突變酶能構(gòu)催化吲哚生成染料靛藍，與R.D.Schmid領(lǐng)導(dǎo)的科研小組獲得的具有三個突變位點的P450BM-3(Phe87Val，Leul88Gln，Ala74Gly)變體酶相比較，在測定的一例中活性提高了1.9-2.4倍，為生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)染料靛藍提供了廣闊的應(yīng)用前景。 |
| 國際公布 |
