| 公開(公告)號 | CN1294258C |
| 公開(公告)日 | 2007.01.10 |
| 申請(專利)號 | CN200410005199.3 |
| 申請日期 | 2004.02.10 |
| 專利名稱 | 一種分離抗菌肽的方法與分離的抗菌肽 |
| 主分類號 | C12N15/00(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/00(2006.01)I;C07K5/00(2006.01)I;C07K14/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2004.1.16 CN 200410015163.3 |
| 申請(專利權(quán))人 | 劉秋云;赫 然 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 劉秋云;赫 然 |
| 地址 | 510275廣東省廣州市新港西路中山大學(xué)生物工程研究中心 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 廣州知友專利商標(biāo)代理有限公司 |
| 代理人 | 宣國華 |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項 | 一種分離抗菌肽的方法，其特征在于包括如下步驟：(1)高保真PCR構(gòu)建酵母α交配因子前導(dǎo)肽與隨機(jī)肽的融合DNA片段，用于隨機(jī)肽的分泌表達(dá)；(2)插入用EcoR I和Xba I雙酶切的含有誘導(dǎo)型啟動子的釀酒酵母載體；(3)為避免未連接的線狀DNA在轉(zhuǎn)化后與酵母基因組DNA發(fā)生重組，用核酸外切酶III和綠豆芽核酸酶對其進(jìn)行消化處理，純化后電激轉(zhuǎn)化釀酒酵母；(4)轉(zhuǎn)化子轉(zhuǎn)接至棉子糖/半乳糖誘導(dǎo)表達(dá)平板，過夜生長后用含大腸桿菌菌種K12D31的上層培養(yǎng)基覆蓋，觀測抑菌圈；或用液體培養(yǎng)基誘導(dǎo)表達(dá)后測抑菌率；(5)對陽性克隆進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測序；(6)利用多肽自動合成儀合成抗菌肽，利用瓊脂糖擴(kuò)散法驗證抗菌活性。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一個分離抗菌肽的方法與抗菌肽，構(gòu)建酵母α交配因子前導(dǎo)肽與隨機(jī)肽的融合DNA片段，插入含有誘導(dǎo)型啟動子的釀酒酵母載體，用核酸外切酶III和綠豆芽核酸酶消化未連接的線狀DNA，純化后電激轉(zhuǎn)化釀酒酵母，轉(zhuǎn)化子過夜生長后用含大腸桿菌菌種K12D31的上層培養(yǎng)基覆蓋，觀測抑菌圈。用液體培養(yǎng)基誘導(dǎo)表達(dá)后測抑菌率。對陽性克隆進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測序。本發(fā)明方法能簡單、高效地發(fā)現(xiàn)抗菌寡肽和多肽；這將為抗生素的發(fā)現(xiàn)開辟新途徑。 |
| 國際公布 |
