| 公開(公告)號(hào) | CN1325651C |
| 公開(公告)日 | 2007.07.11 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN01112983.2 |
| 申請(qǐng)日期 | 2001.05.24 |
| 專利名稱 | 人重組乙型干擾素的高效表達(dá)及其應(yīng)用 |
| 主分類號(hào) | C12N15/63(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/63(2006.01)I;C12N15/67(2006.01)I;C12N15/20(2006.01)I;A61P29/00(2006.01)I;A61P19/02(2006.01)I;A61P17/06(2006.01)I;A61P3/10(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;A61P1/16(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 大連金威基因技術(shù)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 秦 瑩 |
| 地址 | 116001遼寧省大連市民意街40號(hào)海景花園大廈25樓 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海東亞專利商標(biāo)代理有限公司 |
| 代理人 | 董 梅 |
| 國(guó)省代碼 | 遼寧;21 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種高效表達(dá)人重組乙型干擾素的方法，其特征在于：通過(guò)真核細(xì)胞表達(dá)載體來(lái)轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，使之生產(chǎn)重組人乙型干擾素，真核細(xì)胞表達(dá)載體是昆蟲桿狀病毒表達(dá)載體或酵母菌表達(dá)載體中的一種，其中：所述真核細(xì)胞表達(dá)載體是昆蟲桿狀病毒表達(dá)載體時(shí)，所述宿主細(xì)胞是昆蟲細(xì)胞，克隆的人乙型干擾素通過(guò)去除天然的疏水性信號(hào)肽序列，代之以新的桿狀病毒信號(hào)肽來(lái)進(jìn)行修飾，這些嵌合基因被引入桿狀病毒表達(dá)載體后，桿狀病毒多角體蛋白啟動(dòng)子指導(dǎo)被感染的昆蟲細(xì)胞中重組乙型干擾素蛋白的表達(dá)，而由18個(gè)氨基酸組成的桿狀病毒信號(hào)肽僅指導(dǎo)人乙型干擾素的翻譯進(jìn)入昆蟲細(xì)胞的糖基化途徑，其本身并不出現(xiàn)在成熟的人乙型干擾素糖蛋白上；所述真核細(xì)胞表達(dá)載體是酵母菌表達(dá)載體時(shí)，所述宿主細(xì)胞是酵母菌，克隆的人乙型干擾素通過(guò)去除天然的疏水性信號(hào)肽序列，代之以新的分泌型酵母菌信號(hào)肽來(lái)進(jìn)行修飾，這些嵌合基因被引入酵母菌表達(dá)載體后，被轉(zhuǎn)化到酵母菌中發(fā)酵，同時(shí)生產(chǎn)重組人乙型干擾素，分泌型酵母菌信號(hào)肽指導(dǎo)乙型干擾素的翻譯進(jìn)入酵母細(xì)胞的糖基化途徑，并分泌至培養(yǎng)上清中，其本身并不出現(xiàn)在成熟的人乙型干擾素糖蛋白上。 |
| 摘要 | 本發(fā)明人重組乙型干擾素的高效表達(dá)及其應(yīng)用涉及采用生物基因工程的方法在真核細(xì)胞系統(tǒng)中表達(dá)重組人乙型干擾素，以及重組人乙型干擾素的用途。本發(fā)明人重組乙型干擾素的高效表達(dá)系通過(guò)真核細(xì)胞表達(dá)載體來(lái)轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，使之生產(chǎn)重組人乙型干擾素，所述真核細(xì)胞表達(dá)載體是昆蟲桿狀病毒表達(dá)載體時(shí)，所述宿主細(xì)胞是昆蟲細(xì)胞；所述真核細(xì)胞表達(dá)載體是酵母菌表達(dá)載體時(shí)，所述宿主細(xì)胞是酵母菌。本發(fā)明利用具有糖基化功能的昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)和酵母菌表達(dá)系統(tǒng)來(lái)表達(dá)人乙型干擾素基因，所表達(dá)和生產(chǎn)的蛋白量相對(duì)量大、純度高。本發(fā)明中所描述的表達(dá)高產(chǎn)量重組人乙型干擾素的方法可以使臨床應(yīng)用所需要的重組蛋白藥物的制備簡(jiǎn)單化和廉價(jià)化。 |
| 國(guó)際公布 |
