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公開(公告)號
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CN1793373A
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公開(公告)日
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2006.06.28
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申請(專利)號
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CN200510057367.8
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申請日期
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2005.11.04
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專利名稱
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基因工程制備人白細(xì)胞介素24的方法及其表達(dá)載體和工程菌
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主分類號
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C12N15/63(2006.01)I
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分類號
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C12N15/63(2006.01)I;C12N15/24(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計)人
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鄒全明;楊 珺;張衛(wèi)軍
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地址
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400038重慶市沙坪壩區(qū)高灘巖正街30號
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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重慶華科專利事務(wù)所
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代理人
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康海燕
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國省代碼
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重慶;85
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主權(quán)項
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一種基因工程人白細(xì)胞介素24的表達(dá)載體，其特征在于，該載體為含有人白細(xì)胞介素24基因序列hIL-24或人白細(xì)胞介素24基因突變序列hsIL-24的質(zhì)粒載體pET32a(+)，且hIL-24或hsIL-24編碼序列位于pET32a(+)載體上Kpn1和BamH1酶切位點之間，該載體為pET32a(+)-hIL-24或pET32a(+)-hsIL-24；克隆hIL-24或hsIL-24基因的引物為： P15’-GGTACCGACGACGACGACAAGGCCCAGGGCCAAGAATT(Kpn1) P25’-GGATCCTTACAGAGCTTGTAGAATTTCTG(BamHI) 為避免在N端引入Ala和Met兩個多余的氨基酸，在設(shè)計引物時將腸激酶識別位點的編碼堿基，即加黑斜體部分，加入到上游引物中。
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摘要
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本發(fā)明提供一種高效地制備具有一定生物活性的基因工程人白介素24的方法，及其表達(dá)載體和工程菌。本發(fā)明選用融合表達(dá)載體來表達(dá)hIL-24或hsIL-24蛋白，所述的表達(dá)載體為含有人白細(xì)胞介素24基因序列(IL-24)或人白細(xì)胞介素24基因突變序列(sIL-24)的質(zhì)粒載體pET32a(+)，且hIL-24或hsIL-24編碼序列位于pET32a(+)載體上Kpn1和BamH1酶切位點之間。所述的基因工程菌是大腸桿菌，并被本發(fā)明所述的表達(dá)載體所轉(zhuǎn)化，是pET32a(+)-hIL-24/BL21或pET32a(+)-hsIL-24/BL21。本發(fā)明的制備工藝中提供了全套的溶解、復(fù)性、消化以及純化的工藝，使目的蛋白的表達(dá)量能夠達(dá)到30％，復(fù)性得率大于50％，IL-24的純度大于95％，且完全適用于工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)。
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國際公布
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