| 公開(公告)號(hào) | CN1304561C |
| 公開(公告)日 | 2007.03.14 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410081264.0 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.11.13 |
| 專利名稱 | 一種提高紅豆杉內(nèi)生真菌發(fā)酵物中紫杉醇產(chǎn)率的方法 |
| 主分類號(hào) | C12N1/14(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N1/14(2006.01)I;C12P17/02(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 西南師范大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 談 鋒;胡 凱;祝順琴;唐克軒;廖志華 |
| 地址 | 400715重慶市北碚區(qū)西南師范大學(xué) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 重慶華科專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 康海燕 |
| 國(guó)省代碼 | 重慶;85 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種提高紅豆杉內(nèi)生真菌發(fā)酵物中紫杉醇產(chǎn)率的方法，其特征在于：將莖葉核菌屬的產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌(Ectostroma sp.Fr.)XT5與束絲菌屬的產(chǎn)紫杉醇合成前體10-去乙酰巴卡亭III和巴卡亭III的內(nèi)生真菌(Ozonium sp.Lk.exFr.)XT1的培養(yǎng)物進(jìn)行混合培養(yǎng)，提高發(fā)酵物中紫杉醇的產(chǎn)率，步驟如下： (1)培養(yǎng)基制備 ①PDA培養(yǎng)基： ②發(fā)酵培養(yǎng)基： 葡萄糖2-10g/L 蔗糖10-20g/L 蛋白胨0.5-2.5g/L 醋酸鈉0.5-3g/L MgSO42-5mg/L Ca(NO3)25-100mg/L CuSO40.5-300mg/L ZnSO40.5-200mg/L MnCl21-25mg/L FeCl30.5-10mg/L KH2PO410-350mg/L 維生素B10.5-10mg/L 維生素B60.5-30mg/L 苯丙氨酸0.5-5mg/L 苯甲酸鈉50-1000mg/L 乙酰水楊酸鈉0.01-5mg/L 甲醇5-20ml/L 油酸1-10ml/L，pH 6.8； (2)菌體預(yù)培養(yǎng)；分別挑取束絲菌屬的產(chǎn)紫杉醇合成前體10-去乙酰巴卡亭III和巴卡亭III的內(nèi)生真菌XT1和莖葉核菌屬的產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌XT5的菌絲接種于含50ml PDA培養(yǎng)基的發(fā)酵瓶中，培養(yǎng)形成種子發(fā)酵液； (3)菌體生長(zhǎng)培養(yǎng)：分別將上述兩種真菌的種子發(fā)酵液接種于含500ml發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，培養(yǎng)得到含菌體和培養(yǎng)液的真菌菌液； (4)將上述兩種發(fā)酵物，即真菌菌液進(jìn)行混合培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇：將生長(zhǎng)好的XT5菌液與XT1菌液按1∶0.5～4.0的體積份數(shù)比混合，補(bǔ)加總體積的0.5-1.0倍的發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)； (5)紫杉醇提�。簩⑸鲜霭l(fā)酵物4000rpm離心15min，上清液和低溫凍溶的菌體加等體積的乙酸乙酯超聲波萃取1h，重復(fù)提取2次；合并所有乙酸乙酯層，于50℃旋轉(zhuǎn)蒸干，甲醇洗滌，加入二氯甲烷和水1∶1v/v萃取后，將二氯甲烷蒸干，準(zhǔn)確量取1ml乙醇溶解得到紫杉醇樣品； (6)含量檢測(cè)：紫杉醇樣品過濾后上高效液相色譜柱，于228nm做定性及定量檢測(cè)。 |
| 摘要 | 一種提高紅豆杉內(nèi)生真菌發(fā)酵物中紫杉醇產(chǎn)率的方法，本方法利用產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌與產(chǎn)紫杉醇合成前體10-去乙酰巴卡亭III和巴卡亭III分別單獨(dú)培養(yǎng)，然后將培養(yǎng)物進(jìn)行混合培養(yǎng)，并適當(dāng)補(bǔ)加培養(yǎng)基，大幅度提高發(fā)酵物中紫杉醇的產(chǎn)率。本方法的優(yōu)點(diǎn)在于利用兩種同類真菌代謝途徑互補(bǔ)大幅提高發(fā)酵物中紫杉醇的含量，大大高于產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌單獨(dú)培養(yǎng)的產(chǎn)率水平。使利用內(nèi)生真菌進(jìn)行工業(yè)化發(fā)酵培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇成為可能。本方法不但適用于產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌與產(chǎn)紫杉醇合成前體的內(nèi)生真菌混合培養(yǎng)，提高培養(yǎng)物中紫杉醇含量。也適宜于產(chǎn)生天然有用成分的內(nèi)生真菌與產(chǎn)生天然有用成分合成前體的內(nèi)生真菌混合培養(yǎng)，提高培養(yǎng)物中天然有用成分的含量。 |
| 國(guó)際公布 |
