維生素AD滴劑—維生素A—維生素A測定法

本方法采用維生素A測定法測定維生素AD滴劑中維生素A的含量。

本方法適用于維生素AD滴劑。

本法是用分光光度法測定維生素A在特定波長處的吸光度來計算其含量，以單位表示，每單位相當(dāng)于全反式維生素A醋酸酯0.344µg或全反式維生素A醇0.300µg。

1.環(huán)己烷

2. 乙醚（不含過氧化物)

3. 無水硫酸鈉

4.甘油淀粉潤滑劑

1.甘油淀粉潤滑劑

取甘油22g，加入可溶性淀粉9g，加熱至140℃，保持30分鐘并不斷攪拌，放冷，即得。

取裝量差異項下內(nèi)容物，本法是用分光光度法測定維生素A在特定波長處的吸光度來計算其含量，以單位表示，每單位相當(dāng)于全反式維生素A醋酸酯0.344µg或全反式維生素A醇0.300µg。

第一法：取供試品適量，精密稱定，加環(huán)己烷溶解并定量稀釋制成每1mL中含有9-15單位的溶液，照紫外-可見分光光度法，測定其吸收峰的波長，并在下表所列各波長處測定吸光度，計算各吸收度與波長328nm處吸光度的比值和波長328nm處的E1m值。

如果吸收峰波長在326-329nm之間。且所測得各波長吸光度比值不超過表中規(guī)定的±0.02，可用下式計算含量：每1g供試品中含有維生素A的單位= E1m（328nm)×1900

如果吸收峰波長在326-329nm之間，但所測得的各波長吸光度比值超過表中規(guī)定的±0.02，應(yīng)按下式求出校正后的吸光度，然后再計算含量：A₃₂₈(校正)=3.52（2 A₃₂₈- A₃₁₆- A₃₄₀)

如果在328nm處的校正吸光度與未校正的吸光度相差不超過±3.0%，則不用校正吸光度，仍以未經(jīng)校正的吸光度計算含量。

如果校正吸光度與未校正吸光度相差在-15%至-3%之間，則以校正吸光度計算含量。

如果校正吸光度超出未校正吸光度相差在-15%至-3%范圍，或者吸收峰波長不在326nm~329nm之間，則供試品須按下述第二法測定。

第二法 精密稱取供試品適量（約相當(dāng)于維生素A總量500單位以上，重量不多于2g)，置皂化瓶，加乙醇30mL與50%（g/g)氫氧化鉀溶液3mL，置水浴中煮沸回流30分鐘，冷卻后，自冷凝頂端加水10mL沖洗冷凝管內(nèi)部管壁，將皂化液移至分液漏斗中（分液漏斗活塞涂以甘油淀粉潤滑劑)，皂化瓶用水60~100mL分?jǐn)?shù)次洗滌，洗液并入分液漏斗中，用不含過氧化物的乙醚振瑤提取4次，每次振搖約5分鐘，第一次60mL，以后各次40mL，合并乙醚液，用水洗滌數(shù)次，每次約100mL，洗滌應(yīng)緩緩旋動，避免乳化，直至水層遇酚酞指示液不再顯紅色，乙醚液用鋪有脫脂棉與無水硫酸鈉的濾器濾過，濾器用乙醚稀釋至刻度，搖勻；精密稱取適量，置蒸發(fā)皿內(nèi)，水浴上低溫蒸發(fā)至5mL后，置減壓干燥器中，抽干，迅速加異丙醇溶解并定量稀釋制成每1mL中含維生素A9~15單位，照紫外-可見分光光度法，在300nm、310nm、325nm與334nm四個波長處測定吸光度，并測定吸收峰的波長。吸收峰的波長應(yīng)在323nm~327nm之間，且300nm波長處的吸光度與325nm波長處的吸光度的比值應(yīng)不超過0.73，按下式計算校正吸光度：

A₃₂₅（校正)=6.815A₃₂₅ –2.555A₃₂₅ –4.260A₃₂₅ 每1g供試品中含有維生素A的單位=E（325nm,校正)*1830。

如果校正吸光度在未校正吸光度的（100±3)%以內(nèi)，則仍以未經(jīng)校正的吸光度計算含量。

如果吸收峰的波長不在323~327nm之間，或300nm波長處的吸光度與325nm波長處的吸光度的比值超過0.73，則應(yīng)自上述皂化后的乙醚提取液250mL中，另精密量取適量（相當(dāng)于維生素A300~400單位)，減壓蒸去乙醚至約剩5mL，在氮氣流下吹干，立即精密加入甲醇3mL，溶解后，精密量取500uL，注入維生素D測定法第二法項下的凈化系統(tǒng)用色譜柱系統(tǒng)，準(zhǔn)確收集含有維生素A的流出液，，在氮氣流下吹干，而后照上述方法自“迅速加異丙醇溶解”起，依法操作并計算含量。

附注：（1)甘油淀粉潤滑劑 取甘油22g，加入可溶性淀粉9g，加熱至140℃，保持30分鐘并不斷攪拌，放冷，即得。

（2)不含過氧化物的乙醚 照麻醉乙醚項下的過氧化物檢查，如不符合規(guī)定，可用5%硫代硫酸鈉溶液振搖，靜置，分取乙醚層，再用水振搖洗滌1次，重蒸，棄去首尾5%部分，餾出的乙醚再檢查過氧化物，應(yīng)符合規(guī)定。

注1：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一,“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，二部，p.664。