注射用重組人生長激素—重組人生長激素的測定—高效液相色譜法-分子排阻色譜法

本方法采用高分子排阻色譜法測定注射用重組人生長激素中重組人生長激素的含量。

本方法適用注射用于重組人生長激素。

供試品制成磷酸鹽緩沖液（pH7.0)的溶液，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長214nm處檢測重組人生長激素的吸收值，計算出其含量。

1. 異丙醇

2. 磷酸鹽緩沖液（pH7.0)

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

適合分子量為5000-60000球狀蛋白的色譜用親水硅膠為填充劑。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：異丙醇＋磷酸緩沖液= 3＋97

2.2 檢測波長：214nm

2.3 柱溫：室溫

2.4 流速：0.6mL/min

1. 磷酸鹽緩沖液（pH7.0)

無水磷酸氫二鈉5.18g，磷酸二氫鈉3.65g，加水950mL，用85%磷酸溶液調(diào)pH值至7.0，加水至1000mL。

2. 稱取供試品

精密量稱取本品適量。

3. 對照品溶液的制備

精密稱取重組人生長激素單體與二聚體混合對照品適量，用磷酸鹽緩沖液制成每1mL含1.0mg的溶液。

4. 供試品溶液的制備

供試品置于索氏提取器中，加磷酸鹽緩沖液溶解并定量稀釋成每1mL含1.0mg的溶液，混勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應(yīng)符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液20μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長214nm處測定重組人生長激素單體與二聚體的吸收值，計算出其含量。

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學工業(yè)出版社，2005年版，二部，p.413。