醫(yī)學免費論文:黃芩苷對人牙周膜細胞RANKL OPG表達的影響及其作用機制

KEY WORDS: transforming growth factor βⅡ receptor (TGF�拨翿Ⅱ); small interfering RNA(siRNA); receptor activator of nuclear factor�拨蔅 ligand (RANKL); osteoprotegerin (OPG); periodontal ligament cells (PDLC)

骨保護素(osteoprotegerin, OPG)及其配體核因子�拨蔅受體激活物配基(receptor activator of nuclear factor�拨蔅 ligand, RANKL)是調(diào)控破骨細胞生成和活化的關鍵因子，在調(diào)節(jié)骨質吸收中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)OPG�睷ANKL能在人牙周膜成纖維細胞(periodontal ligament cell, PDLC)表達，并受多種因素調(diào)節(jié)[1��3]。在口腔局部微環(huán)境中,眾多因素通過作用于牙周組織，使OPG與RANKL的濃度增加或減少來調(diào)控局部骨組織代謝。

細菌激發(fā)的訴諸免疫炎癥反應是造成和影響牙周組織破壞的主要原因。黃芩苷的抗炎作用則決定了其在牙周病的防治中可能起到重要作用。有研究證實，黃芩苷、淫羊霍苷和大黃素組合時可抑制內(nèi)毒素(LPS)刺激下人牙齦成纖維細胞中前列腺素E2(PGE2)的產(chǎn)生，亦可抑制實驗性牙周炎牙槽骨吸收[4]。本研究的第一個目的，即擬通過觀察黃芩苷對PDLC上OPG�睷ANKL表達的影響，從而證實黃芩苷對牙槽骨的吸收的調(diào)節(jié)作用醫(yī).學.全.在.線zxtf.net.cn。

牙周炎時，T細胞的數(shù)量、活性增高，導致炎癥細胞因子分泌增加，加重牙周炎癥和骨吸收。轉化生長因子β(transforming growth factor β, TGF�拨�)可以抑制T細胞的活性和增殖[5��6]。黃芩苷抗炎作用的機制也與抑制白介素��1(IL��1)、腫瘤壞死因子α(TNF�拨�)等炎性因子的過度產(chǎn)生有關[7��8]，因而設想黃芩苷的抗炎抗骨吸收作用可能是通過TGF�拨聦崿F(xiàn)的。本研究的第二個目的，即黃芩苷是否通過增強TGF�拨聦�T細胞的抑制作用，引起T細胞活性降低、數(shù)量減少，導致T細胞在內(nèi)毒素作用下分泌TNF�拨恋妊装Y因子減少，繼而影響OPG�睷ANKL，降低破骨細胞形成，從而減少骨丟失。

為達到以上兩個研究目的，本實驗首先構建了靶向轉化生長因子βⅡ型受體(transforming growth factor βⅡreceptor, TGF�拨垄騌)的小干擾RNA (small interfering RNA, siRNA)真核表達載體，并將其轉染T細胞，隨后將正常PDLC與轉染或未轉染siRNA的T細胞置于加有內(nèi)毒素和黃芩苷的培養(yǎng)液中，觀察黃芩苷對正常PDLC上OPG�睷ANKL表達的影響。

1 材料與方法

1.1 TGF�拨垄騌靶向siRNA真核表達載體的構建 根據(jù)GenBank中報道的TGF�拨垄騌核苷酸序列，參考siRNA的設計原則，按照pSilencer3.1H1載體的設計要求，設計2條siRNA序列。TGF�拨垄騌 siRNA轉錄模板由北京華大公司合成，RNAi TGF�拨垄騌目標序列依次為：5′�睪ATCCGCAGCAT��

GTGTATAGCTGAATTCAAGAGATTCAGCTA��

TACACATGCTGCTTTTTTGGAAA��3′和5′�睪A��

TCCGCCAGCCATTGCTCATAGATTCAAGAG��

ATCTATGAGCAATGGCTGGCTTTTTTGGAA��

A��3′，分別命名為siRNA1和siRNA2。兩個片段直接與經(jīng)BamHⅠ和HindⅢ酶切的pSilencer3.1H1載體連接。將連接產(chǎn)物轉化大腸桿菌DH5α，搖菌培養(yǎng)后提取質粒，送北京華大公司進行序列測定。將測序正確的克隆分別命名為siRNA1和siRNA2。

上一頁  [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] 下一頁