1.5.2 透射電鏡檢查
于術(shù)后第 7 天,取大鼠左心室組織,4℃條件下制成約1mm3 成組織塊,迅速置于2.5%戊二醛固定液中固定24 小時(shí),經(jīng)脫水、浸透、包埋后制成切片,進(jìn)行染色,在透射電鏡下觀察微血管超微結(jié)構(gòu)的改變。
1.5.3 血漿sTM 檢測(cè)
各組動(dòng)物均于細(xì)胞移植后1、7、28 天取血2ml(n=6/組/時(shí)間點(diǎn)),3000rpm 離心10min,收集上清液,按照ELISA 檢測(cè)試劑盒說明書檢測(cè)血清中sTM 的濃度。
1.5.4 心功能檢測(cè)
將大鼠麻醉后,備皮,仰臥位固定于檢查臺(tái)上,用10MHz 超聲探頭進(jìn)行超聲檢查,每只大鼠記錄3 個(gè)心動(dòng)周期以計(jì)算左室收縮末期容積(LV IDs)、左室舒張末期容積(LVIDd)內(nèi)徑的平均值、左室射血分?jǐn)?shù)(EF% )和短軸縮短率(FS% )。每個(gè)指標(biāo)檢測(cè)3 次,計(jì)算均值為最終的數(shù)值。
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
用 SPSS15.0 軟件分析,計(jì)量資料以x±s 表示,組間均數(shù)的比較采用單因數(shù)方差分析,方差齊者用LSD 檢驗(yàn),方差不齊者用 Games-Howell 檢驗(yàn),以P≤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.1 微血管原位血栓形成
模型組 HE 染色顯示,心肌微血管內(nèi)彌漫分布著由血細(xì)胞、血小板和纖維蛋白構(gòu)成的半透明粉紅色血栓混合物,并可見局部心肌凋亡壞死 (圖-1)。馬休黃-酸性品紅-苯胺藍(lán)(改良Lendrum 法)染色則表明,血管內(nèi)微栓塞的成分多由紅色的纖維素和藍(lán)色的膠原所組成(圖-2)。而在假手術(shù)組和對(duì)照組則未見同樣的特征性改變。
2.2 透射電鏡觀察結(jié)果
模型組微血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞核過度收縮,核膜有下大面積染色質(zhì)凝聚,形成高密度斑塊,飲泡數(shù)量明顯減少,線粒體絮狀改變,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少,內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接呈增寬斷裂狀,血管腔攣縮狹窄,腔內(nèi)可見膠原成分。假手術(shù)組可見微血管內(nèi)皮細(xì)胞核呈梭形結(jié)構(gòu)良好,質(zhì)膜下存在大量飲泡,核內(nèi)細(xì)胞器豐富,核一端相鄰細(xì)胞緊密連接清晰可見,管腔大完整,內(nèi)有大量紅細(xì)胞。
2.3 血漿sTM 含量測(cè)定
與對(duì)照組相比,術(shù)后模型組在各時(shí)間點(diǎn)大鼠血清sTM 含量明顯增加(P<0.05),1 天時(shí)既有明顯升高,7 天時(shí)最高,至28 天時(shí)下降至術(shù)后一天水平(表-1)。假手術(shù)組術(shù)組與對(duì)照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
2.4 心功能檢測(cè)
與對(duì)照組比較,模型組在術(shù)后1 天心功能即開始下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);7 天時(shí)各項(xiàng)心功能指標(biāo),模型組與對(duì)照組相比存在明顯降低(P<0.05);28 天時(shí),可見差異繼續(xù)增大(P<0.05)。而在同時(shí)間點(diǎn)假手組與對(duì)照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。