實(shí)驗(yàn)四 有機(jī)磷農(nóng)藥的檢驗(yàn)
【目的要求】
1．掌握有機(jī)磷農(nóng)藥的提取凈化和檢驗(yàn)方法。
2．掌握根據(jù)有機(jī)磷農(nóng)藥結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)進(jìn)行定性分析。
【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】
一、檢材采取
如系口服中毒，可取嘔吐物，胃內(nèi)容，剩余飲食物，血液、肝臟等。
如系呼吸道吸人中毒，可取血液、肺、肝等。
如系皮膚，粘膜接觸中毒的，應(yīng)取接觸部位的局部組織，血和肝臟。
二、檢材的提取
取死者胃內(nèi)容物2~5克，置乳缽中，少量多次地加人無水硫酸鈉研磨至干沙狀后，移于150ml碘量瓶中，加人二氯甲烷20ml，振蕩浸提l0min，殘?jiān)儆枚燃淄?0ml 重復(fù)提取一次，過濾合并濾液，濾液于60℃水浴上濃縮至2毫升，或在K·D濃縮器上減壓濃縮至2ml。
經(jīng)上述方法提取的有機(jī)磷，如果雜質(zhì)比較少，即可用于檢驗(yàn)，如果雜質(zhì)較多，則需進(jìn)一步凈化。
三、凈化
取直徑2厘米，長30厘米的層析柱一支，底部放一團(tuán)脫脂棉，管內(nèi)加人2厘米厚的無水硫酸鈉，然后填人氧化鋁混合吸附劑（活性炭2克，硅藻土4克，氧化鋁4克混合而成)最上層再加無水硫酸鈉2厘米，加滿二氯甲烷后，打開下面水止，待二氯甲烷流至柱頂端水平時，將上面所提取的濃縮液5毫升加人，打開水止待流至柱頂端水平時，再用100毫升二氯甲烷淋洗（柱流出速度控制在5m1/分)，收集二氯甲烷淋洗液置K·D濃縮器另一個蒸餾瓶中于60℃水浴上減壓濃縮至10毫升，留作下面的試驗(yàn)用。
四、顯色反應(yīng)
（1)間苯二酚——?dú)溲趸c反應(yīng)（靈敏度1~5微克)
敵百蟲，敵敵畏和二溴磷水解后生成二氯乙醛，在堿性情況下與間苯二酚縮合生成紅色化合物。
試劑：
5％間苯二酚乙醇溶液
5%氫氧化鈉溶液
操作：
取檢液一滴于濾紙上，稍干，加間苯二酚醇溶液和氫氧化鈉溶液各1滴，在酒精燈上微烤片刻，如有敵百蟲、敵敵畏或二溴磷，即顯紅色。
水合氯醛有同樣作用，如將操作改在試管中進(jìn)行，氫氧化鈉溶液改用飽和碳酸鈉溶液，則水合氯配合呈黃紅色，敵百蟲等仍為紅色。
(2)偶氮色素反應(yīng)（靈敏度1:500,000)
有機(jī)磷農(nóng)藥中的硝基苯基，經(jīng)還原可變?yōu)楸桨坊�，苯胺基可�?jīng)重氮化生成重氮鹽，重氮鹽再與酚或芳香胺類偶合生成偶氮色素，1605、甲基1605、殺螟松等均有作用。
試劑：
10％鹽酸溶液
鋅粉
乙醇
0.25％亞硝酸鈉溶液
2.5%氨基磺酸銨（或2.5%脲素)溶液
堿性乙萘酚溶液：0.5克乙萘酚溶于50毫升10%氫氧化鈉中。
0.5%N萘基乙二胺鹽酸鹽溶液
操作
取檢材提取的濃縮液約3-4滴于試管中，加乙醇液2~3毫升稀釋，加鋅粉0.1克。10%鹽酸1毫升于水浴中加熱使檢液充分還原至基本上無色，取出放冷，用滴管吸取清液于另一試管中，加0.25％亞硝酸鈉1~2滴，振搖，放置1~2分鐘，再加2.5％氨基磺酸銨4~5zxtf.net.cn/sanji/滴，振搖，以除去過剩的亞硝酸，待無氣泡發(fā)生后，將試液分倒在二個小瓷皿中，分別加入乙萘酚和萘基乙二胺試劑數(shù)滴，如有1605等有機(jī)磷農(nóng)藥則分別顯橙一紅色或紅一紫紅色。
〔說明〕
1．本反應(yīng)的關(guān)鍵一是要還原好，二是過剩的亞硝酸要除盡，尤其是用萘基乙二胺時，亞硝酸鹽要除盡，否則空白也可能出現(xiàn)微弱的紅紫色。
2．1605還原后的重氮鹽與萘基乙二胺偶合，需在酸性溶液中進(jìn)行，偶合時，如酸度不夠，則可能導(dǎo)致陰性，此時，再加數(shù)滴10％鹽酸即可。
P—S— |
RO |
RO |
O(S) |
有機(jī)磷農(nóng)藥中凡有 結(jié)構(gòu)的，在堿性水溶液中易水解生成硫
化物，與亞硝酰鐵氰化鈉作用，生成紫紅色絡(luò)合物。
Na2S+Na2〔Fe(CN)5NO〕→Na4〔Fe(CN)5NOS〕
試劑：
10%氫氧化鈉
1%亞硝酰鐵氰化鈉溶液（新配)
操作：
取檢材濃縮液3~4滴于試管中加入乙醇1~2毫升稀釋，加蒸餾水1毫升，加10%氫氧化鈉0.5毫升，在沸水浴中加熱10分鐘，取出放冷，滴加1％亞硝酰鐵氰化鈉溶液3~4滴，如有1059、3911、1240、4049、樂果等有機(jī)磷農(nóng)藥即顯紫紅色，但很快消失。
五、薄層層析法：
吸附劑：硅膠G或硅膠GF254
展開劑：
① 環(huán)己烷：氯仿＝1:1
② 苯：醋酸乙酯＝zxtf.net.cn/kuaiji/9:1
③ 苯：石油醚：丙酮＝7:2:1
④ 苯：環(huán)己烷＝4:1
⑤ 環(huán)己烷：丙酮＝4:1
顯色方法：
1．溴酚藍(lán)—醋酸法（靈敏度1~5ug)
2．間苯二酚—?dú)溲趸c法（靈敏度1~5ug)
試劑：
1)溴酚藍(lán)試劑：0.1g溴酚藍(lán)溶于10ml 丙酮中，再用1％硝酸銀丙酮水溶液（丙酮：水＝1:3)稀釋至l00ml
2)5%醋酸溶液
3)1%間苯二酚醇液
4)5%氫氧化鈉溶液
操作及結(jié)果：
（一)含硫類有機(jī)磷農(nóng)藥的檢驗(yàn)：
將檢液及標(biāo)準(zhǔn)樣品點(diǎn)于一薄層板上，同法點(diǎn)另一塊薄層板，然后分別在兩種展開劑中展開后，稍晾干，噴溴酚藍(lán)至板上呈現(xiàn)均勻藍(lán)色，置60℃烘箱中加熱5~10分鐘，再噴5％醋酸溶液至背景為淺黃色，含硫有機(jī)磷即呈藍(lán)色斑，有機(jī)磷含量大時，斑點(diǎn)中心呈黃色，外圈呈藍(lán)色，測定Rf值同標(biāo)樣比較即可判定為何種有機(jī)磷。
（二)非含硫類有機(jī)磷農(nóng)藥的檢驗(yàn)：
將檢液及標(biāo)準(zhǔn)DDVP標(biāo)準(zhǔn)液點(diǎn)于同一薄層板上，同法點(diǎn)另一塊薄層板，然后分別在環(huán)己烷：氯仿（1:1)及苯：醋酸乙酯（9:1)兩種展開劑中展開后稍晾干，即噴間苯二酚—?dú)溲趸c試劑稍加熱。敵敵畏、敵百蟲及二溴磷等有機(jī)磷農(nóng)藥顯紅色斑點(diǎn)，背景無色或污綠色，其他有機(jī)磷不顯色，氯醛、水合氯醛同樣顯色。
