(一) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇 在衛(wèi)生毒理學(xué)領(lǐng)域中，體內(nèi)試驗(yàn)以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為研究對(duì)象，最終是為了闡明受試外來化合物對(duì)人的急性危害性質(zhì)和危害強(qiáng)度。所以選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)，要求在其接觸化合物之后的毒性反應(yīng)，應(yīng)當(dāng)與人接觸該化合物的毒性反應(yīng)基本一致，雖然利用任何一zxtf.net.cn/shouyi/種或幾種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的急性毒性結(jié)果向人外推都必須十分慎重，但這一選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的原則仍非常重要。 1.物種選擇 以選擇哺乳動(dòng)物為主。目前實(shí)際應(yīng)用中以大鼠和小鼠為主，尤以大鼠使用很多。需指出大鼠并非對(duì)外來化合物都最敏感。家兔常用于研究化合物的皮膚毒性，包括對(duì)粘膜的刺激。貓、狗也用于急性毒性試驗(yàn)，但因價(jià)貴不易于大量使用。豬為雜食動(dòng)物，對(duì)一些化合物的生物效應(yīng)表現(xiàn)與人有相似之處，尤其是皮膚結(jié)構(gòu)與人較近似。但因體大、價(jià)貴，不便大量使用。 歸納起來，在進(jìn)行化合物急性毒性研究中，選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的原則是：盡量選擇對(duì)化合物毒性反應(yīng)與人近似的動(dòng)物；易于飼養(yǎng)管理，試驗(yàn)操作方便；易于獲得、品系純化，且價(jià)格較低的動(dòng)物。為了有利于預(yù)測(cè)化合物對(duì)人的危害，要求選擇兩種以上的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，最好一種為嚙齒類，一種為非嚙齒類，分別求出其急性毒性參數(shù)。 一般研究外來化合物急性毒性，需雌雄兩性動(dòng)物同時(shí)分別進(jìn)行，每個(gè)劑量組兩性動(dòng)物數(shù)相等。急性毒性使用小鼠體重以18~25g、大鼠180~240g、豚鼠200~250g、家兔2~2.5kg、貓1.5~2.0kg左右為宜。 (二) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物喂養(yǎng)環(huán)境 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物喂養(yǎng)室室溫應(yīng)控制在22±3℃，家兔可控制在20±3℃，相對(duì)濕度30%～73%，無對(duì)流風(fēng)。每籠動(dòng)物數(shù)以不干擾動(dòng)物個(gè)體活動(dòng)及不影響試驗(yàn)觀察為度，必要時(shí)需單籠飼養(yǎng)。飼養(yǎng)室采用人工晝夜為好，早6點(diǎn)至晚6點(diǎn)進(jìn)行12小時(shí)光照，其余12小時(shí)黑暗，一般食用常規(guī)試驗(yàn)室飼料，自由飲水。 (三) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒方法 1.經(jīng)口(胃腸道)接觸 目的是研究外來化合物能否經(jīng)胃腸道吸收及求出經(jīng)口接觸的致死劑量(LD50)等。由于外來化合物可以污染飲水及食物，因此，此種染毒方式在衛(wèi)生毒理學(xué)中占有重要地位。 (1) 灌胃 是將液態(tài)受試化合物或固態(tài)、氣態(tài)化合物溶于某種溶劑中，配制成一定濃度，裝入注射器等定量容器，經(jīng)過導(dǎo)管注入胃內(nèi)。 在每一試驗(yàn)系列中，同物種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌胃體積最好一致，即以單位體重計(jì)算所給予的毫升數(shù)應(yīng)一致，即ml/kg或ml/g計(jì)。這是因?yàn)槌赡陮?shí)驗(yàn)動(dòng)物的胃容量與體重之間有一定的比例。按單位體重計(jì)算灌胃液的體積，受試化合物的吸收速度相對(duì)較為穩(wěn)定。小鼠一次灌胃體積在0.2~1.0ml/只或0.1~0.5ml/10g體重較合適，大鼠一次灌胃體積不超過5ml/只(通常用0.5~1.0ml/100g體重)，家兔不超過10ml/2kg體重，狗不超過50ml/10kg體重。 (2) 吞咽膠囊 將一定劑量受試化合物裝入藥用膠囊內(nèi)，強(qiáng)制放到動(dòng)物的舌后后咽部迫使動(dòng)物咽下。此種方式劑量準(zhǔn)確，尤其適用于易揮發(fā)、易水解和有異味的化合物。家兔及貓、狗等大動(dòng)物可用此法。 2.經(jīng)呼吸道接觸 例如CO、CO2等在常溫、常壓下為氣態(tài)，或在生產(chǎn)過程中和生活過程中以蒸氣態(tài)、氣溶膠、煙、塵狀態(tài)污染生產(chǎn)與生活環(huán)境空氣，此時(shí)就有可能經(jīng)呼吸道吸入。研究外來化合物在上述物理性狀下能否被吸入機(jī)體，且造成損害，在衛(wèi)生毒理學(xué)中也占有重要位置。 實(shí)施經(jīng)口接觸時(shí)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在接觸受試化合物前應(yīng)禁食，以防止胃納充盈影響化合物的吸收和毒性。大鼠、小鼠因主要在夜間進(jìn)食，應(yīng)采用隔夜禁食。接觸受試化合物之后應(yīng)繼續(xù)禁食3~4小時(shí)。 (1) 吸入接觸 分為兩種方式，一是靜式吸入，一是動(dòng)式吸入。 ① 靜式吸入：系將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于一個(gè)有一定體積的密閉容器內(nèi)，加入定量的易揮發(fā)的液態(tài)化合物或一定體積的氣態(tài)化合物，在容器內(nèi)形成所需要的受試化合物濃度的空氣環(huán)境。這種接觸方式，雖然有許多不足之處，但由于其設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、消耗受試化合物較少，還有其使用價(jià)值；尤其是適用于小動(dòng)物接觸易揮發(fā)液態(tài)化合物的急性毒性研究。為保障試驗(yàn)順利進(jìn)行，染毒柜體積、放置動(dòng)物種類和數(shù)量及放置時(shí)間相互關(guān)系見表4-1。 表4-1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物最低需氣量及不同體積染毒柜應(yīng)放置動(dòng)物數(shù)關(guān)系 動(dòng)物種屬 | 呼吸通氣量 (L/小時(shí)) | 最低需氣量 (L/小時(shí)) | 不同容積染毒柜放置動(dòng)物數(shù)(只) | 25L | 50L | 100L | 300L | 小 鼠 大 鼠 | 1.45 10.18 | 2.45 30.5 | 3~5 | 6~10 | 12~15 1~2 | 36~40 5~6 |
② 動(dòng)式吸入：是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處于空氣流動(dòng)的染毒柜中，染毒柜裝置備有新鮮空氣補(bǔ)入與含受試化合物空氣排出的動(dòng)力系統(tǒng)和隨時(shí)補(bǔ)充受試化合物的配氣系統(tǒng)。動(dòng)式吸入接觸方式一般來講優(yōu)于靜式吸入接觸，但其裝置復(fù)雜，消耗受試化合物的量大，易于污染操作室環(huán)境。 3.經(jīng)皮膚接觸 液態(tài)、粉塵態(tài)和氣態(tài)外來化合物勻有接觸皮膚的機(jī)會(huì)。有的化合物不僅能與外露皮膚接觸并吸收，還有的化合物可以穿透衣服而經(jīng)皮膚吸收。 (1) 經(jīng)皮膚吸收 研究外來化合物經(jīng)皮膚吸收應(yīng)當(dāng)盡量選擇皮膚解剖、生理與人類較近似的動(dòng)物為對(duì)象，目前多選用家兔和豚鼠。但由于研究化合物經(jīng)皮膚吸收的毒性(求經(jīng)皮LD50)所需的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物較多，使用家兔、豚鼠不夠經(jīng)濟(jì)，也常用大鼠代替。 定性試驗(yàn)：為考察一個(gè)外來化合物能否經(jīng)皮吸收引起中毒，可先進(jìn)行定性試驗(yàn)。小鼠或大鼠的浸尾試驗(yàn)是常用的定性試驗(yàn)方法。 定量試驗(yàn)：是在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物已脫好毛的部位定量涂布受試化合物，以求該化合物經(jīng)皮吸收的劑量－反應(yīng)關(guān)系，求經(jīng)皮LD50。 (2) 局部作用試驗(yàn) 不少外來化合物可以引起皮膚接觸部位的局部損傷。研究化合物局部毒高級(jí)職稱考試網(wǎng)性作用常用皮膚斑貼法或兔耳法。 4.注射途徑接觸受試物 采用注射途徑進(jìn)行外來化合物的急性毒性試驗(yàn)，主要用于比較毒性研究，以及化合物的代謝、毒物動(dòng)力學(xué)和急救藥物篩選等研究。 表4-2 幾種動(dòng)物不同注射途徑注射量(ml)范圍 注射途徑 | 小鼠 | 大鼠 | 豚鼠 | 兔 | 狗 | 靜脈 肌肉 皮下 腹腔 | 0.2~0.5 0.1~0.2 0.1~0.5 0.2~1.0 | 1.0~2.0 0.2~0.5 0.5~1.0 1.0~3.0 | 1.0~5.0 0.2~0.5 0.5~1.0 2.0~5.0 | 3.0~10 0.5~1.0 1.0~3.0 5.0~10.0 | 5.0~15.0 2.0~5.0 3.0~10.0 － |
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