血細胞檢驗是指對血液中白細胞(WBC) 、紅細胞(RBC) 、血小板( PLT) 、血紅蛋白(Hb) 及相關數(shù)據(jù)的計數(shù)檢測分析,也稱血常規(guī)檢驗。血常規(guī)檢驗不僅是診斷各種血液病的主要依據(jù),而且對其他系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別也可提供許多重要信息,是臨床醫(yī)學檢驗中最常用、最重要的基本內(nèi)容之一。血常規(guī)檢驗最原始的手段是通過顯微鏡人工鏡檢。隨著基礎醫(yī)學的發(fā)展,高科技的應用,血液細胞分析儀已成為取代人工鏡檢進行血常規(guī)分析的重要手段,尤其是帶分類的血液分析儀。無論是人工鏡檢或使用血液分析儀,要獲得血常規(guī)檢驗穩(wěn)定、可靠、準確的數(shù)據(jù),防止使臨床診療作出錯誤的判斷,實驗室檢驗必須要充分考慮影響血常規(guī)檢驗中的多種影響因素,并嚴格加以控制。
一、標本的采集
為了取得準確、可靠的檢驗結(jié)果,必須取得高質(zhì)量的標本。高質(zhì)量的標本是高質(zhì)量檢驗的第一步,保證血液標本中各項細胞的完整形態(tài)是作為血常規(guī)檢驗用的高質(zhì)量標本的最基本要求。血液細胞檢驗標本的制備分為采集和抗凝兩個步驟。
1. 標本的采集:可在不同采血部位取得血常規(guī)檢驗標本,最常用的途徑是靜脈采血和末梢毛細血管采血。文獻報道表明,靜脈血血樣是最可靠的標本,手指血是末梢毛細血管血樣中與醫(yī)學全在,線靜脈血差異最小且較為穩(wěn)定的血樣。有研究表明,與靜脈血相比,手指血的準確性和可重復性仍然較差,白細胞計數(shù)明顯升高( + 8 %) ,而血小板計數(shù)明顯降低( - 9 %) 。因此,絕大多數(shù)專家建議,血常規(guī)檢驗特別是應用血液分析儀時,應使用靜脈血。
2. 標本的抗凝:用于血常規(guī)檢驗的血樣必須經(jīng)抗凝劑抗凝處理,在目前的眾多抗凝劑中,乙二胺四乙酸( EDTA) ( EDTA-Na2 ,EDTA-K2 ,EDTA-K3) 是對白細胞形態(tài)和血小板影響相對較小的抗凝劑,最適合用于血常規(guī)檢驗。除采血因素(生理性因素、采血部位等) 的影響外,多數(shù)情況下,血樣的質(zhì)量取決于血液和抗凝劑的比例。血液比例過高時,由于抗凝劑相對不足,血漿中出現(xiàn)微凝血塊的可能性增加,在用于血細胞分析儀時,微凝血塊可能阻塞儀器,同時影響一些檢驗指標。血液比例過低,抗凝劑相對過剩,對檢驗指標會造成嚴重影響。血液經(jīng)EDTA 抗凝后,細胞的形態(tài)會發(fā)生改變,這種改變和時間及EDTA 濃度有關。EDTA 的最佳濃度( 與血液比) 為1. 5mg/ ml ,如果血樣少,EDTA 的濃度達到2. 5 mg/ ml,中性粒細胞腫脹,分葉消失,血小板腫脹、崩解,產(chǎn)生正常血小板大小的碎片,這些改變都會使血常規(guī)檢驗和血細胞計數(shù)得出錯誤結(jié)果,這一點在用自動血細胞分析儀時尤為重要。靜脈血和末梢血均可經(jīng)抗凝劑抗凝成全血標本(標本中不含稀釋液,或?qū)吮驹斐傻南♂尩挠绊憳O小) 。顯而易見,末梢血抗凝標本要達到合適的血液和抗凝劑的比例非常困難,因此,制備全血比例非常困難。多數(shù)專家建議,在制備全血標本時,應使用定量的含EDTA 鹽的真空采血管采集靜脈血。無論鏡檢或使用血液細胞分析儀, 由于絕大多數(shù)的對標本稀釋的稀釋液中含有抗凝劑, 在一定量的稀釋液中可直接加入微量靜脈血或末梢血液(10～40μl) 即可制備成通常所說的預稀釋標本。多數(shù)情況下預稀釋標本的制備適用于末梢血的血樣。
二、標本的稀釋
血液是由血細胞和血漿兩部分組成的紅色黏稠混懸液。在進行血細胞檢驗計數(shù)時,直接用血液計數(shù)是困難的,無論是鏡檢還是用血細胞分析儀,血液均需合適準確的稀釋后才能進行血細胞的檢驗計數(shù)。基于血細胞分析儀的基本原理,在血細胞分析儀的設計應用中,稀釋倍數(shù)和計數(shù)容量是最重要的設計指標之一。
20 世紀50 年代初,美國人庫爾特研制了電阻法(小孔原理)血細胞分析儀。血細胞的稀釋液為介質(zhì)流動的形式通過傳感器測量計數(shù)。血細胞通過傳感器時一定需要排隊通過,否則
可能就會造成重合損失。實際應用時,將血液稀釋于稀釋液中形成稀釋標本(稀釋比為1 ∶N) ,以流動檢測的方式測出一定量(V) 的稀釋標本內(nèi)的血細胞數(shù)(T) ,經(jīng)換算后得出血液中的細胞濃度(L) ,即L=T×
N/V。
由此可見,準確合理的稀釋倍數(shù)(在用于儀器時, RBC、PLT 的稀釋倍數(shù)一般為1∶10000～1∶3 000 ;WBC、Hb 的稀釋倍數(shù)一般為1∶250 左右) 和準確、穩(wěn)定的測量容量是血細胞檢測的又一重要基礎。稀釋倍數(shù)過低,會形成細胞排隊通過傳感器的重合缺損;稀釋倍數(shù)過大,則會造成一定測量容量內(nèi)血細胞數(shù)量過少,這都會嚴重影響血液細胞檢驗的測量精度。
三、標本的儲存
如前文所述,抗凝劑因時間和濃度的不同會造成對血細胞形態(tài)的影響。有研究表明,用EDTA 抗凝靜脈血標本,在標本收集后的5 min 內(nèi)或30 min 后,8 h 內(nèi)(室溫) 檢測,可以得到最佳的檢測結(jié)果。如果不需要血小板和白細胞分類的準確數(shù)據(jù),則標本可以在2～8℃的條件下儲存24 h。預稀釋標本一般需要在標本制備后10 min 內(nèi)予以測量。如果稀釋液中添加細胞穩(wěn)定劑,預稀釋標本的存放時間也不可超過4 h。
總之,影響血常規(guī)檢驗結(jié)果的因素很多,要想取得準確的檢驗數(shù)據(jù),就要在實驗的每一個步驟中都嚴格按照操作規(guī)程進行。
