1．試述瑞氏染色中pH對細(xì)胞染色的影響及實際工作中應(yīng)注意的問題。
【答案】細(xì)胞的各種成分均由蛋白質(zhì)構(gòu)成，由于蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，所帶正負(fù)電荷的數(shù)量隨溶液pH值而定。對某一蛋白質(zhì)而言，如環(huán)境pH<pI(蛋白質(zhì)的等電點)，則該蛋白質(zhì)在酸性環(huán)境中正電荷增多，易與醫(yī)學(xué)全.在線zxtf.net.cn伊紅結(jié)合，染色偏紅；相反，當(dāng)環(huán)境的pH>pI即在堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多，易與亞甲藍(lán)結(jié)合，染色偏藍(lán)。臨床上常用緩沖液(pH 6.4～6.8)來調(diào)節(jié)染色時的pH值，同時還應(yīng)注意使用清潔、中性的玻片，優(yōu)質(zhì)的甲醇配制染液以期達(dá)到滿意的染色效果。
2．簡述氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)測定的原理及注意事項。
【答案】原理：紅細(xì)胞在Hb轉(zhuǎn)化液中溶血后，除SHb，外各種Hb均可被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白(Hi)，Hi再與試劑中CN-結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)。HiCN的最大吸收波峰為540nm，根據(jù)測得的吸光度值，即可計算出Hb濃度。注意事項：①試劑中的氰化鉀有劇毒，處理不當(dāng)可造成嚴(yán)重公害；②HiCN轉(zhuǎn)化液不能儲存在塑料瓶中，否則會使CN-丟失，結(jié)果偏低；③此法不能測定SHb，對HbCO的轉(zhuǎn)化較慢，遇高球蛋白或高白細(xì)胞血癥時溶液易混濁。
3．試述標(biāo)本溶血的主要原因及溶血后產(chǎn)生的主要影響。
【答案】引起標(biāo)本溶血的原因主要有：注射器和容器不干燥、不清潔，壓脈帶捆扎太緊、時間太長，穿刺不順利產(chǎn)生的損傷，抽血速度太快，未取下針頭直接將血液注入容器、抗凝混勻用力振蕩等。標(biāo)本溶血產(chǎn)生的影響主要有：紅細(xì)胞總數(shù)、血細(xì)胞比容降低，紅細(xì)胞內(nèi)成分外溢，影響鉀、鎂、氨基轉(zhuǎn)移酶、膽紅素等多項指標(biāo)的準(zhǔn)確性。
4．簡述血紅蛋白測定的方法學(xué)評價。
【答案】 (1)HiCN法：①此法是ICSH和WHO推薦的參考方法，具有操作簡便、結(jié)果穩(wěn)定可靠、除SHb外其他Hb衍生物均可檢測、讀取吸光度后可直接定值等優(yōu)點；②該法致命弱點是試劑中含劇毒藥氰化鉀，使用處理不當(dāng)可造成嚴(yán)重公害。廢液須經(jīng)過處理方可排放；③此法也不能測定SHb，對HbCO轉(zhuǎn)化較慢，遇高球蛋白或高白細(xì)胞血癥時溶液易混濁。 (2)SLS法：①此法突出優(yōu)點是試劑無毒性；②操作簡單，呈色穩(wěn)定，準(zhǔn)確性和精確性符合要求，被推薦為次選方法；③但SLS本身質(zhì)量差異較大，且SIS會破壞WBC，不適于同時進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)和Hb測定。(3)堿羥血紅蛋白(AHD575)測定法：準(zhǔn)確度、精密度均較高，可用氯化血紅素作標(biāo)準(zhǔn)品。但該法反應(yīng)產(chǎn)物的吸收峰位于575nm處，溶液中堿性較高，目前血細(xì)胞分析儀均未采用。 (4)疊氮高鐵血紅蛋白(HiN3)測定法：與HiCN相似，準(zhǔn)確度、精密度較高，試劑毒性比HiCN低，但仍存在公害問題。 (5)溴代十六烷基三甲胺(CTAB)血紅蛋白測定法：該法試劑溶血性強又不破壞WBC，可同時進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)，可用于血細(xì)胞分析儀自動檢測Hb和WBC。缺點是對Hb測定結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度略低于以上各法。
5．簡述十二烷基月桂酰硫酸鈉(SLS)血紅蛋白測定的原理。
【答案】原理：除SHb外，各種Hb均可與低濃度十二烷基月桂酰硫酸鈉作用，生成SLS-Hb棕紅色化合物。SLS-Hb最大吸收波峰538nm，波谷500nm。，肩峰560nm。由于摩爾消光系數(shù)尚未最后確認(rèn)，因此不能用吸光度“A”值直接計算出濃度。只有借助于經(jīng)HiCN法定值的抗凝血或溶血液，制備標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，間接得到Hb濃度。
6．簡述網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)的臨床意義。
【答案】(1)判斷骨髓的造血功能：①網(wǎng)織紅細(xì)胞增多：表示骨髓造血功能旺盛。急性溶血性貧血、急性失血性貧血時網(wǎng)織紅細(xì)胞可明顯增高；缺鐵性貧血和巨幼細(xì)胞性貧血時，網(wǎng)織紅細(xì)胞正�；蜉p度增高；②網(wǎng)織紅細(xì)胞減少：表示骨髓造血功能低下，多見于再生障礙性貧血。(2)作為貧血治療的療效觀察指標(biāo)：缺鐵性貧血和巨幼細(xì)胞性貧血的患者治療后，網(wǎng)織紅細(xì)胞升高說明治療有效，貧血愈嚴(yán)重，網(wǎng)織紅細(xì)胞升得越高，而且其升高在紅細(xì)胞和出升高之前；反之，如果網(wǎng)織紅細(xì)胞不見增高，說明治療無效或骨髓造血功能有障礙。
(3)骨髓移植后監(jiān)測骨髓造血恢復(fù)情況。
