其人:
沈萍 Shen Ping 職稱職務(wù):教授、博士生導(dǎo)師 學(xué)科專業(yè):微生物學(xué)及微生物遺傳學(xué) 研究方向:(1)細(xì)菌質(zhì)粒的分子生物學(xué)及基因的水平轉(zhuǎn)移;(2)嗜鹽古生菌及其噬菌體的分子生物學(xué)和熱化學(xué)研究;(3)原核基因的克隆表達(dá)及實(shí)用工程菌株的構(gòu)建
第一章 1. 巴斯德的工作 (1) 發(fā)現(xiàn)并證實(shí)發(fā)酵是由微生物引起的 (2) 徹底否定了“自然發(fā)生”學(xué)說(shuō) (3) 免疫學(xué)——預(yù)防接種 (4) 其他貢獻(xiàn):巴斯德消毒法等 2. 柯赫的工作 (1) 微生物學(xué)基本操作技術(shù)方面的貢獻(xiàn) a) 細(xì)菌純培養(yǎng)方法的建立 b) 配制培養(yǎng)基 c) 流動(dòng)蒸汽滅菌 d) 染色觀察和顯微攝影 (2) 對(duì)病原細(xì)菌的研究作出了突出的貢獻(xiàn): a) 具體證實(shí)了炭疽病菌是炭疽病的病原菌! ) 發(fā)現(xiàn)了肺結(jié)核病的病原菌 c) 證明某種微生物是否為某種疾病病原體的基本原則——柯赫原則 1 在每一病例中都出現(xiàn)這種微生物; 2 要從寄主分離出這樣的微生物并在培養(yǎng)基中培養(yǎng)出來(lái); 3用這種微生物的純培養(yǎng)接種健康而敏感的寄主,同樣的疾病會(huì)重復(fù)發(fā)生; 4 從試驗(yàn)發(fā)病的寄主中能再度分離培養(yǎng)出這種微生物來(lái)。 微生物的類群及特點(diǎn):個(gè)體小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)、胃口大、食譜廣、繁殖快、易培養(yǎng)、數(shù)量大、分布廣、種類多、級(jí)界寬、變異易、抗性強(qiáng)、休眠長(zhǎng)、起源早、發(fā)現(xiàn)晚、。 第三章 特殊細(xì)胞壁的細(xì)菌:某些分枝桿菌和諾卡氏菌的細(xì)胞壁主要由一類被稱為霉菌酸 (Mycolic acid)的枝鏈羥基脂質(zhì)組成,后者被認(rèn)為與這些細(xì)菌感染能力有關(guān)。 由磷脂分子形成的雙分子膜中加入甾醇類物質(zhì)可以提高膜的穩(wěn)定性: 真核生物細(xì)胞膜中一般含有膽固醇等甾醇,含量為5%-25%。 原核生物與真核生物的最大區(qū)別就是其細(xì)胞膜中一般不含膽固醇,而是含有hopanoid(藿烷類化合物 )。 硫粒:很多化能自養(yǎng)菌在進(jìn)行產(chǎn)能代謝或生物合成時(shí),常涉及對(duì)還原性的硫化物如H2S,硫代硫酸鹽等的氧化。 在環(huán)境中還原性硫素豐富時(shí),常在細(xì)胞內(nèi)以折光性很強(qiáng)的硫粒的形式積累硫元素。當(dāng)環(huán)境中環(huán)境中還原性硫缺乏時(shí),可被細(xì)菌重新利用。 微生物儲(chǔ)藏物的特點(diǎn)及生理功能: 1) 不同微生物其儲(chǔ)藏性內(nèi)含物不同。例如厭氣性梭狀芽孢桿菌只含PHB,大腸桿菌只儲(chǔ)藏糖原,但有些光合細(xì)菌二者兼有。 2) 微生物合理利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的一種調(diào)節(jié)方式。當(dāng)環(huán)境中缺乏能源而碳源豐富時(shí),細(xì)胞內(nèi)就儲(chǔ)藏較多的碳源類內(nèi)含物,甚至達(dá)到細(xì)胞干重的50%,如果把這樣的細(xì)胞移入有氮的培養(yǎng)基時(shí),這些儲(chǔ)藏物將被作為碳源和能源而用于合成反應(yīng)。 3) 儲(chǔ)藏物以多聚體的形式存在,有利于維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的平衡,避免不適合的pH,滲透壓等的危害。例如羥基丁酸分子呈酸性,而當(dāng)其聚合成聚-β-羥丁酸( PHB)就成為中性脂肪酸了,這樣便能維持細(xì)胞內(nèi)中性環(huán)境,避免菌體內(nèi)酸性增高。 4) 儲(chǔ)藏物在細(xì)菌細(xì)胞中大量積累,是重要的自然資源。 氣泡的膜只含蛋白質(zhì)而無(wú)磷脂。二種蛋白質(zhì)相互交連,形成一個(gè)堅(jiān)硬的結(jié)構(gòu),可耐受一定的壓力。膜的外表面親水,而內(nèi)側(cè)絕對(duì)疏水,故氣泡只能透氣而不能透過(guò)水和溶質(zhì)。 細(xì)菌芽孢的特點(diǎn): 整個(gè)生物界中抗逆性最強(qiáng)的生命體,是否能消滅芽孢是衡量各種消毒滅菌手段的最重要的指標(biāo)。 芽孢是細(xì)菌的休眠體,在適宜的條件下可以重新轉(zhuǎn)變成為營(yíng)養(yǎng)態(tài)細(xì)胞;產(chǎn)芽孢細(xì)菌的保藏多用其芽孢。 芽孢的有無(wú)、形態(tài)、大小和著生位置是細(xì)菌分類和鑒定中的重要指標(biāo)。 芽孢與營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞相比化學(xué)組成存在較大差異,容易在光學(xué)顯微鏡下觀察。(相差顯微鏡直接觀察;芽孢染色) 細(xì)菌糖被的特點(diǎn) (1)主要成分是多糖、多肽或蛋白質(zhì),尤以多糖居多。經(jīng)特殊的莢膜染色,特別是負(fù)染色(又稱背景染色)后可在光學(xué)顯微鏡清楚地觀察到它的存在。 (2)產(chǎn)生糖被是微生物的一種遺傳特性,其菌落特征及血清學(xué)反應(yīng)是是細(xì)菌分類鑒定的指標(biāo)之一。 (3)莢膜等并非細(xì)胞生活的必要結(jié)構(gòu),但它對(duì)細(xì)菌在環(huán)境中的生存有利。(詳見(jiàn)P 57-58) (4)細(xì)菌糖被與人類的科學(xué)研究和生產(chǎn)實(shí)踐有密切的關(guān)系。(詳見(jiàn)P58) 細(xì)菌的趨避運(yùn)動(dòng):鞭毛的功能是運(yùn)動(dòng),這是原核生物實(shí)現(xiàn)其趨性(taxis)即趨向性的最有效方式。(參見(jiàn)P60) 化學(xué)趨避運(yùn)動(dòng)或趨化作用(chemotaxis):細(xì)菌對(duì)某化學(xué)物質(zhì)敏感,通過(guò)運(yùn)動(dòng)聚集于該物質(zhì)的高濃度區(qū)域或低濃度區(qū)域。 光趨避運(yùn)動(dòng)或趨光性(phototaxis):有的細(xì)菌能區(qū)別不同波長(zhǎng)的光而集中在一定波長(zhǎng)光區(qū)內(nèi)。 趨磁運(yùn)動(dòng)或趨磁性(magnetotaxis),趨磁細(xì)菌根據(jù)磁場(chǎng)方向進(jìn)行分布。 放線菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu) t單細(xì)胞,大多由分枝發(fā)達(dá)的菌絲組成; t菌絲直徑與桿菌類似,約1mm;t細(xì)胞壁組成與細(xì)菌類似,革蘭氏染色陽(yáng)性(少數(shù)陰性); t細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與細(xì)菌基本相同, 按形態(tài)和功能可分為營(yíng)養(yǎng)菌絲、氣生菌絲和孢子絲三種。 1、養(yǎng)菌絲:匍匐生長(zhǎng)于培養(yǎng)基內(nèi),吸收營(yíng)養(yǎng),也稱基內(nèi)菌絲。 2、氣生菌絲:營(yíng)養(yǎng)菌絲發(fā)育到一定階段,伸向空間形成氣生菌絲, 3、孢子絲:氣生菌絲發(fā)育到一定階段,其上可分化出形成孢子的菌絲,即孢子絲,又稱產(chǎn)孢絲或繁殖菌絲。其形狀和排列方式因種而異,常被作為對(duì)放線菌進(jìn)行分類的依據(jù)。 立克次氏體: 1)某些性質(zhì)與病毒相近 a 、專性活細(xì)胞寄生物,除五日熱(戰(zhàn)壕熱)立克次氏體(Rickettsia wolhynica)外均不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖。這是因?yàn)樗鼈凅w內(nèi)酶系不完全,一些必需的養(yǎng)料需從宿主細(xì)胞獲得;細(xì)胞膜比一般細(xì)菌的膜疏松,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)較易通過(guò),細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)也容易漏出。這種可透性膜,一方面使它們有可能容易從宿主細(xì)胞獲得大分子物質(zhì),另一方面也決定了它們一旦離開(kāi)宿主細(xì)胞則易死亡) b、大小介于病毒與一般細(xì)菌之間,除伯氏立克次氏體(Rickettsia burneti)外,均不能通過(guò)細(xì)菌過(guò)濾器(球狀體:0.2-0.5 mm;桿狀體:0.3-0.5 x 0.3-2 mm;) 2)由于長(zhǎng)期適應(yīng)的結(jié)果,立克次氏體形成了一種必須從一種宿主傳至另一宿主的特殊生活方式,它們幾乎都有自己的天然動(dòng)物宿主,主要以節(jié)肢動(dòng)物(虱、蜱、螨等)為媒介,寄生在它們的消化道表皮細(xì)胞中,然后通過(guò)節(jié)肢動(dòng)物叮咬和排泄物傳播給人和其他動(dòng)物。有的立克次氏體能引起人類的流行性斑疹傷寒、恙蟲(chóng)熱、Q熱等嚴(yán)重疾病,而且立克次氏體大多是人獸共患病原體。對(duì)熱、干燥、光照、脫水及普通化學(xué)試劑的抗性均差,離開(kāi)宿主僅能存活數(shù)小時(shí)至數(shù)日,但如隨節(jié)肢動(dòng)物糞便排出,在空氣中自然干燥后,其抗性變得相當(dāng)強(qiáng)。有的可在室溫下保持毒力二年左右。 支原體: 1)無(wú)細(xì)胞壁,只有細(xì)胞膜,細(xì)胞形態(tài)多變; 2)個(gè)體很小,能通過(guò)細(xì)菌過(guò)濾器,曾被認(rèn)為是最小的可獨(dú)立生活的細(xì)胞型生物。 3)可進(jìn)行人工培養(yǎng),但營(yíng)養(yǎng)要求苛刻,菌落微小,呈典型的“油煎荷包蛋”; 4)一些支原體能引起人類、牲畜、家禽和作物的病害疾病,如肺炎支原體; 5) 應(yīng)用活組織細(xì)胞培養(yǎng)病毒或體外組織細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),常被支原體污染。 衣原體: 1)細(xì)胞結(jié)構(gòu)與細(xì)菌類似;具有類似的細(xì)胞壁,細(xì)胞壁內(nèi)也含有胞壁酸、二氨基庚二酸等。核糖體也是由30S和50S二個(gè)亞基組成。 2)細(xì)胞呈球形或橢圓形,直徑為0.2-0.3 mm,能通過(guò)細(xì)菌濾器; 3)專性活細(xì)胞內(nèi)寄生;衣原體有一定的代謝活性,能進(jìn)行有限的大分子合成,但缺乏產(chǎn)生能量的系統(tǒng),必須依賴宿主獲得ATP,因此又被稱為“能量寄生型生物” 4)在宿主細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖具有獨(dú)特的生活周期,即存在原體和始體兩種形態(tài)。具有感染性的原體通過(guò)胞飲作用進(jìn)入宿主細(xì)胞,被宿主細(xì)胞膜包圍形成空泡,原體逐漸增大成為始體。始體無(wú)感染性,但能在空泡中以二分裂方式反復(fù)繁殖,形成大量新的原體,積聚于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)成為各種形狀的包涵體(inclusion body),宿主細(xì)胞破裂,釋放出的原體則感染新的細(xì)胞。 5)衣原體廣泛寄生于人類、哺乳動(dòng)物及鳥(niǎo)類,少數(shù)致病,如沙眼衣原體是人類砂眼的病原體,甚至引起結(jié)膜炎、角膜炎、角膜血管翳等臨床癥狀,成為致盲的重要原因。1956年,我國(guó)微生物學(xué)家湯飛凡等應(yīng)用雞胚卵黃囊接種法,在國(guó)際上首先成功地分離培養(yǎng)出沙眼衣原體。現(xiàn)衣原體可用多種細(xì)胞培養(yǎng)。 6) 衣原體不耐熱,60度10分鐘即被滅活,但它不怕低溫,冷凍干燥可保藏多年。對(duì)紅霉素、氯霉素、四環(huán)素敏感。 粘細(xì)菌生活史: 1、營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞:桿狀、柔軟、缺乏堅(jiān)硬的細(xì)胞壁,無(wú)鞭毛,產(chǎn)生粘液,可在固體表面作“滑行”運(yùn)動(dòng),以分類方式進(jìn)行繁殖。 2、子實(shí)體:營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育到一定階段,在適宜的條件下彼此向?qū)Ψ揭苿?dòng),在一定位置聚集成團(tuán),形成形態(tài)各異,肉眼可見(jiàn)的子實(shí)體。單個(gè)子實(shí)體中可能含有109個(gè)或更多由某些營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)變而成的休眠結(jié)構(gòu),稱為拈孢子(mycospore)。能形成子實(shí)體是粘細(xì)菌區(qū)別于其它原核微生物的最主要標(biāo)志。而在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)階段如果有足夠的養(yǎng)料就不形成子實(shí)體,當(dāng)營(yíng)養(yǎng)耗盡時(shí),營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞群就開(kāi)始形成子實(shí)體。子實(shí)體干燥后,可借助風(fēng)力、水力等到處傳播,遇到適宜的環(huán)境又萌發(fā)成為營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。 蛭弧菌特性: 1、鞭毛多為偏端單生; 2、生活方式多樣:寄生、兼性寄生,極少數(shù)腐生。一般認(rèn)為后者為突變株; 3、可能成為防治有害細(xì)菌的一種有力武器。 藍(lán)細(xì)菌特性: 1)分布極廣; 2)形態(tài)差異極大;有球狀、桿狀和絲狀體,個(gè)體直徑一般為3-10 mm,有的可達(dá)60 mm。當(dāng)許多個(gè)體聚集在一起,可形成肉眼可見(jiàn)的、很大的群體。若繁茂生長(zhǎng),可使水的顏色隨菌體顏色而變化。 3)細(xì)胞中含有葉綠素a,進(jìn)行產(chǎn)氧型光合作用。它被認(rèn)為是地球上生命進(jìn)化過(guò)程中第一個(gè)產(chǎn)氧的光合生物,對(duì)地球上從無(wú)氧到有氧的轉(zhuǎn)變、真核生物的進(jìn)化起著里程碑式的作用。 4)具有原核生物的典型細(xì)胞結(jié)構(gòu):細(xì)胞核無(wú)核膜,也不進(jìn)行有絲分裂,細(xì)胞壁含胞壁酸和二氨基庚二酸,革蘭氏染色陰性。 5)營(yíng)養(yǎng)極為簡(jiǎn)單,不需要維生素,以硝酸鹽或氨作為氮源,多數(shù)能固氮,其異形細(xì)胞(heterocyst)是進(jìn)行固氮的場(chǎng)所。 6)分泌粘液層、莢膜或形成鞘衣,因此具有強(qiáng)的抗干旱能力。 7)無(wú)鞭毛,但能在固體表面滑行,進(jìn)行光趨避運(yùn)動(dòng)。 8)許多種類細(xì)胞質(zhì)中有氣泡,使菌體漂浮,保持在光線最充足的地方,以利光合作用。 古生菌: 1977年,Carl Woese以16S rRNA序列比較為依據(jù),提出的獨(dú)立于真細(xì)菌和真核生物之外的生命的第三種形式。在分類地位上與真細(xì)菌和真核生物并列為三域(Domain),并且在進(jìn)化譜系上更接近真核生物。在細(xì)胞構(gòu)造上與真細(xì)菌較為接近,同屬原核生物。 多生活于一些生存條件十分惡劣的極端環(huán)境中,例如高溫、高鹽、高酸等。 真菌:一類低等真核生物 1、具有細(xì)胞核,進(jìn)行有絲分裂; 2、細(xì)胞質(zhì)中含有線粒體但沒(méi)有葉綠體,不進(jìn)行光合作用,無(wú)根、莖、葉的分化; 3、以產(chǎn)生有性孢子和無(wú)性孢子二種形式進(jìn)行繁殖; 4、營(yíng)養(yǎng)方式為化能有機(jī)營(yíng)養(yǎng)(異養(yǎng))、好氧; 5、不運(yùn)動(dòng)(僅少數(shù)種類的游動(dòng)孢子有1-2根鞭毛); 6、種類繁多,形態(tài)各異、大小懸殊,細(xì)胞結(jié)構(gòu)多樣; 霉菌: “絲狀真菌”的統(tǒng)稱,不是分類學(xué)上的名詞。霉菌菌體均由分枝或不分枝的菌絲(hypha)構(gòu)成。許多菌絲交織在一起,稱為菌絲體(mycelium)。 霉菌在自然界分布極廣,土壤、水域、空氣、動(dòng)植物體內(nèi)外均有它們的蹤跡。常在潮濕的氣候下大量生長(zhǎng)繁殖,長(zhǎng)出肉眼可見(jiàn)的絲狀、絨狀或蛛網(wǎng)狀的菌絲體,有較強(qiáng)的陸生(可能因?yàn)楹醚,在液體中生活不好)。它們同人類的生產(chǎn)、生活關(guān)系密切,是人類實(shí)踐活動(dòng)中最早認(rèn)識(shí)和利用的一類微生物。 食物、工農(nóng)業(yè)制品的霉變(據(jù)統(tǒng)計(jì)全世界平均每年由于霉變而不能食(飼)用的谷物約占2%,這是一筆相當(dāng)驚人的經(jīng)濟(jì)損失。 有用物品的生產(chǎn)(如風(fēng)味食品、酒精、抗生素(青霉素、灰黃霉素)、有機(jī)酸(檸檬酸、葡萄糖酸、延胡索酸等)、酶制劑(淀粉酶、果膠酶、纖維素酶等)、維生素、甾體激素等。在農(nóng)業(yè)上用于飼料發(fā)酵、植物生長(zhǎng)刺激素(赤霉素)、殺蟲(chóng)農(nóng)藥(白僵菌劑)等) 引起動(dòng)植物疾病,可引起約3萬(wàn)種植物病害,是植物傳染性病害的主要病原微生物,例如,我國(guó)在1950年發(fā)生的麥銹病和1974年發(fā)生的稻瘟病,使小麥和水稻分別減產(chǎn)了60億公斤; 霉菌可引起多種人及動(dòng)物的皮膚疾病及其他一些深層病變,如既可侵害皮膚、粘膜,又可侵害肌肉、骨骼、內(nèi)臟,如可引起肺炎,此外,一些被霉菌感染的食品也可使人得病,如大米、花生中黃曲霉素、黃米毒素等均可引起動(dòng)物致癌) 腐生型霉菌在自然界物質(zhì)轉(zhuǎn)化中也有十分重要的作用; 菌絲的特化: 1) 菌環(huán):菌絲交織成套狀 2) 菌網(wǎng):菌絲交織成網(wǎng)狀 捕蟲(chóng)菌目(Zoopagales)這是在長(zhǎng)期的自然進(jìn)化中形成的特化結(jié)構(gòu),主要功能是用于吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。這些生長(zhǎng)在土壤中真菌是捕食者,形成的特異菌絲構(gòu)成巧妙的網(wǎng),可以捕捉小型原生動(dòng)物或無(wú)脊椎動(dòng)物,捕獲物死后,菌絲伸入體內(nèi)吸收營(yíng)養(yǎng)。 3)附枝:匍匐菌絲、假根(類似樹(shù)根,吸收營(yíng)養(yǎng)),功能是固著和吸收營(yíng)養(yǎng),例如根霉(Rhizopus)匍匐枝和基質(zhì)接觸處分化出來(lái)的根狀結(jié)構(gòu)。 4)附著枝:若干寄生真菌由菌絲細(xì)胞生出1-2個(gè)細(xì)胞的短枝,以將菌絲附著于宿主上,這種特殊的結(jié)構(gòu)即附著枝。 5)吸器:一些專性寄生真菌從菌絲上分化出來(lái)的旁枝,侵入細(xì)胞內(nèi)分化成指狀、球狀或絲狀,用以吸收細(xì)胞內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)。為吸收菌絲,進(jìn)入藻類或植物細(xì)胞,二者共生。 6)附著胞,許多植物寄生真菌在其芽管或老菌絲頂端發(fā)生膨大,并分泌粘性物,借以牢固地粘附在宿主的表面,這一結(jié)構(gòu)就是附著胞,附著胞上再形成纖細(xì)的針狀感染菌絲,以侵入宿主的角質(zhì)層而吸取營(yíng)養(yǎng)。 7)菌核:是一種休眠的菌絲組織。由菌絲密集地交織在一起,其外層教堅(jiān)硬、色深,內(nèi)層疏松,大多呈白色。有些寄生性真菌與宿主共同形成假菌核。例如冬蟲(chóng)夏草: 8)子座:菌絲交織成墊狀、殼狀等,在子座外或內(nèi)可形成繁殖器官。 霉菌菌落的特點(diǎn): 由粗而長(zhǎng)的分枝狀菌絲組成,菌落疏松,呈絨毛狀、絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀,比細(xì)菌菌落大幾倍到幾十倍,有的沒(méi)有固定大小。各種霉菌,在一定培養(yǎng)基上形成的菌落大小、形狀、顏色等相 對(duì)穩(wěn)定,所以菌落特征也為分類依據(jù)之一。 霉菌的繁殖方式: 1)無(wú)性孢子繁殖 不經(jīng)兩性細(xì)胞配合,只是營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的分裂或營(yíng)養(yǎng)菌絲的分化(切割)而形成新個(gè)體的過(guò)程。 無(wú)性孢子有:厚垣孢子、節(jié)孢子、分生孢子、孢囊孢子等。 2)有性孢子繁殖 兩個(gè)性細(xì)胞結(jié)合產(chǎn)生新個(gè)體的過(guò)程: a)質(zhì)配:兩個(gè)性細(xì)胞結(jié)合,細(xì)胞質(zhì)融合,成為雙核細(xì)胞,每個(gè)核均含單倍染色體(n+n)。 b)核配:兩個(gè)核融合,成為二倍體接合子核,此時(shí)核的染色體數(shù)是二倍(2n)。 c)減數(shù)分裂:具有雙倍體的細(xì)胞核經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂,核中的染色體數(shù)目又恢復(fù)到單倍體狀態(tài)。 霉菌有性孢子繁殖的特點(diǎn): a)不如無(wú)性繁殖那么經(jīng)常與普遍,在自然條件下較多,在一般 培養(yǎng)基上不常見(jiàn)。 b)方式因菌種不同而異,有的兩條營(yíng)養(yǎng)菌絲就可以直接結(jié)合, 有的則由特殊的性細(xì)胞(性器官)相互交配,形成有性孢子。 c)核配后一般立即進(jìn)行減數(shù)分裂,因此菌體染色體數(shù)目為單倍, 雙倍體只限于接合子。 d)霉菌的有性繁殖存在同宗配合和異宗配合兩種情況。 e)霉菌的有性孢子包括接合孢子、卵孢子、子囊孢子等。 霉菌的生活史: 無(wú)性繁殖階段;菌絲體(營(yíng)養(yǎng)體)在適宜的條件下產(chǎn)生無(wú)性孢子,無(wú)性孢子萌發(fā)形成新的菌絲體,多次重復(fù)。 有性繁殖階段;在發(fā)育后期,在一定條件下,在菌絲體上分化出特殊性器官(細(xì)胞),質(zhì)配、核配、減數(shù)分裂后形成單倍體孢子,再萌發(fā)形成新的菌絲體。 有一些霉菌,至盡尚未發(fā)現(xiàn)其生活史中有有性繁殖階段,這類真菌稱為半知菌。 霉菌孢子的特點(diǎn): 霉菌具有極強(qiáng)的繁殖能力,可以通過(guò)無(wú)性繁殖或有性繁殖方式產(chǎn)生大量新個(gè)體。雖然其菌絲體上任一部分的菌絲碎片都能進(jìn)行繁殖,但在正常自然條件下,它們還主要靠形形色色的無(wú)性或有性孢子進(jìn)行繁殖。 霉菌的孢子具有小、輕、干、多以及形態(tài)色澤各異、休眠期長(zhǎng)和抗逆性強(qiáng)等特點(diǎn)。但與細(xì)菌的芽孢卻有很大的差別。霉菌孢子形態(tài)常有球形、卵形、橢圓形、禮帽形、土星型、腎形、線形、鐮刀形等。每個(gè)個(gè)體所產(chǎn)生的孢子數(shù)量,經(jīng)常是成千上萬(wàn)的,有時(shí)竟然達(dá)到幾百億、幾千億,甚至更多。孢子的這些特點(diǎn),都有助于真菌在自然界中隨機(jī)散播和繁殖。 對(duì)人類的實(shí)踐來(lái)說(shuō),孢子的這些特點(diǎn)有利于接種、擴(kuò)大培養(yǎng)、菌種選育、保藏和鑒定等工作。對(duì)人類不利之處則是易于造成污染、霉變和易于傳播動(dòng)植物的真菌疾病。 真菌孢子與細(xì)菌芽孢的比較 項(xiàng)目 霉菌孢子 細(xì)菌芽孢 大小 大 小 數(shù)目 一條菌絲或一個(gè)細(xì)胞產(chǎn)多個(gè) 1個(gè)細(xì)胞只產(chǎn)1個(gè) 形態(tài) 形態(tài)、色澤多樣 形態(tài)簡(jiǎn)單 形成部位 可在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外形成 只在細(xì)胞內(nèi)形成 細(xì)胞核 真核 原核 功能 最重要的繁殖方式 不是繁殖方式,是抗性構(gòu)造(休眠方式) 抗熱性 不強(qiáng),在60-70℃下易殺死 極強(qiáng),一般100℃數(shù)十分鐘才能殺死 產(chǎn)生菌 絕大多數(shù)種類可以產(chǎn)生 少數(shù)細(xì)菌可產(chǎn)生 酵母菌的菌落:與細(xì)菌菌落類似,但一般較細(xì)菌菌落大且厚,表面濕潤(rùn),粘稠,易被挑起,多為乳白色,少數(shù)呈紅色。 酵母菌的分布及與人類的關(guān)系: 1、多分布在含糖的偏酸性環(huán)境,也稱為“糖菌”。 2、重要的微生物資源; 3、重要的科研模式微生物; 4、有些酵母菌具有危害性; 酵母菌的繁殖及生活史: 1、無(wú)性繁殖 1)芽殖:主要的無(wú)性繁殖方式,成熟細(xì)胞長(zhǎng)出一個(gè)小芽,到一定程度后脫離母體繼續(xù)長(zhǎng)成新個(gè)體。 2)裂殖:少數(shù)酵母菌可以象細(xì)菌一樣借細(xì)胞橫割分裂而繁殖,例如裂殖酵母。 2、有性繁殖 酵母菌以形成子囊和子囊孢子的形式進(jìn)行有性繁殖: 1)兩個(gè)性別不同的單倍體細(xì)胞靠近,相互接觸; 2)接觸處細(xì)胞壁消失,質(zhì)配; 3)核配,形成二倍體核的接合子: A、以二倍體方式進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖,獨(dú)立生活; 下次有性繁殖前進(jìn)行減數(shù)分裂。 B、進(jìn)行減數(shù)分裂,形成4個(gè)或8個(gè)子囊孢子,而原有的營(yíng)養(yǎng) 細(xì)胞就成為子囊。子囊孢子萌發(fā)形成單倍體營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。 3、生活史 酵母菌單倍體和雙倍體細(xì)胞均可獨(dú)立存在,有三種類型: 1)營(yíng)養(yǎng)體只能以單倍體形式存在(核配后立即進(jìn)行減數(shù)分裂) 2)營(yíng)養(yǎng)體只能以雙倍體形式存在(核配后不立即進(jìn)行減數(shù)分裂) 3)營(yíng)養(yǎng)體既可以單倍體也可以雙倍體形式存在,都可進(jìn)行出芽繁殖。 酵母菌中尚未發(fā)現(xiàn)其有性階段的被稱為假酵母 微生物的營(yíng)養(yǎng)類型: 醫(yī)學(xué)全在線友情提供 zxtf.net.cn 1. 光能無(wú)機(jī)自養(yǎng)型(光能自養(yǎng)型)能以CO2為主要唯一或主要碳源;進(jìn)行光合作用獲取生長(zhǎng)所需要的能量; 以無(wú)機(jī)物如H2、H2S、S等作為供氫體或電子供體,使CO2還原為細(xì)胞物質(zhì); 例如:藻類及藍(lán)細(xì)菌等和植物一樣,以水為電子供體(供氫體),進(jìn)行產(chǎn)氧型的光合作用,合成細(xì)胞物質(zhì)。紅硫細(xì)菌,以H2S為電子供體,產(chǎn)生細(xì)胞物質(zhì),并伴隨硫元素的產(chǎn)生。 2.光能有機(jī)異養(yǎng)型(光能異養(yǎng)型) 不能以CO2為主要或唯一的碳源;以有機(jī)物作為供氫體,利用光能將CO2還原為細(xì)胞物質(zhì);在生長(zhǎng)時(shí)大多數(shù)需要外源的生長(zhǎng)因子; 例如,紅螺菌屬中的一些細(xì)菌能利用異丙醇作為供氫體,將CO2 還原成細(xì)胞物質(zhì),同時(shí)積累丙酮。 3.化能無(wú)機(jī)自養(yǎng)型(化能自養(yǎng)型) 生長(zhǎng)所需要的能量來(lái)自無(wú)機(jī)物氧化過(guò)程中放出的化學(xué)能; 以CO2或碳酸鹽作為唯一或主要碳源進(jìn)行生長(zhǎng)時(shí),利用H2、H2S、Fe2+、NH3或NO2-等無(wú)機(jī)物作為電子供體使CO2還原成細(xì)胞物質(zhì)。 4.化能有機(jī)異養(yǎng)型(化能異養(yǎng)型) 生長(zhǎng)所需要的能量均來(lái)自有機(jī)物氧化過(guò)程中放出的化學(xué)能; 生長(zhǎng)所需要的碳源主要是一些有機(jī)化合物,如淀粉、糖類、纖維素、有機(jī)酸等。 氧化還原電位:又稱氧化還原電勢(shì)(redox potential),是度量某氧化還原系統(tǒng)中 的還原劑釋放電子或氧化劑接受電子趨勢(shì)的一種指標(biāo),其單位是V(伏)或mV(毫伏)。 配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)盡量利用廉價(jià)且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成份,特別是在發(fā)酵工業(yè)中,以降低生產(chǎn)成本。 以粗代精:對(duì)微生物來(lái)說(shuō),各種粗原料營(yíng)養(yǎng)更加完全,效果更好。而且在經(jīng)濟(jì)上也節(jié)約。 以“野”代“家”:以野生植物原料代替栽培植物原料,如木薯、橡子、薯芋等都是富含淀粉質(zhì)的野生植物,可以部分取代糧食用于工業(yè)發(fā)酵的碳源。 以廢代好:以工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中易污染環(huán)境的廢棄物作為培養(yǎng)微生物的原料。例如,在微生物單細(xì)胞蛋白的工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中,常常利用糖蜜(制糖工業(yè)中含有蔗糖的廢液)、乳清(乳制品工業(yè)中含有乳糖的廢液)、豆制品工業(yè)廢液及黑廢液(造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿)等都可作為培養(yǎng)基的原料。在再如,工業(yè)上的甲烷發(fā)酵主要利用廢水、廢渣作原料,而在我國(guó)農(nóng)村,已推廣利用人畜糞便及禾草為原料發(fā)酵生產(chǎn)甲烷作為燃料。另外,大量的農(nóng)副產(chǎn)品或制品,如麩皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白胨等都是常用的發(fā)酵工業(yè)原料。 以簡(jiǎn)代繁:生產(chǎn)上改進(jìn)培養(yǎng)基成分時(shí),一般都以“加”法居多,即設(shè)法使其營(yíng)養(yǎng)越來(lái)越豐富、含量越來(lái)越高。這對(duì)微生物生長(zhǎng)不一定都有利,有時(shí)可嘗試使用“減”法,幾用稀薄的培養(yǎng)基成分或成分較少的培養(yǎng)基來(lái)取代原有的培養(yǎng)基成分,以求取得更好的效果。 以烴代糧:以石油或天然氣副產(chǎn)品代替糖質(zhì)原料來(lái)培養(yǎng)微生物。除了生產(chǎn)石油蛋白外,還可以將石油產(chǎn)品轉(zhuǎn)化成一些產(chǎn)值更高的高級(jí)醇、脂肪酸、環(huán)烷酸等化工產(chǎn)品和若干合成物,以及對(duì)石油產(chǎn)品的品質(zhì)進(jìn)行改良,如脫硫、脫蠟等。 以纖代糖:開(kāi)發(fā)利用纖維素這種世界上含量最豐富的可再生資源。將大量的纖維素農(nóng)副產(chǎn)品轉(zhuǎn)變?yōu)閮?yōu)質(zhì)飼料、工業(yè)發(fā)酵原料、燃料及人類的食品及飲料。 以無(wú)機(jī)氮代蛋白質(zhì):即以大氣氮、銨鹽、硝酸鹽或尿素等一類非蛋白質(zhì)或非氨基酸廉價(jià)原料用作發(fā)酵培養(yǎng)基的原料,讓微生物轉(zhuǎn)化成菌體蛋白質(zhì)或含氮的發(fā)酵產(chǎn)物供人們利用。 第五章 燃燒與生物氧化的比較: 比較項(xiàng)目 燃燒 生物氧化 反應(yīng)步驟 一步式快速反應(yīng) 順序嚴(yán)格的系列反應(yīng) 條件 激烈 由酶催化,條件溫和 產(chǎn)能形式 熱、光 大部分為ATP 能量利用率 低 高 生物氧化的形式包括某物質(zhì)與氧結(jié)合、脫氫或脫電子三種; 生物氧化的功能則有產(chǎn)能(ATP)、產(chǎn)還原力[H]和產(chǎn)小分子中間代謝物三種; 呼吸作用與發(fā)酵作用的根本區(qū)別:電子載體不是將電子直接傳遞給底物降解的中間產(chǎn)物,而是交給電子傳遞系統(tǒng),逐步釋放出能量后再交給最終電子受體。 能進(jìn)行硝酸鹽呼吸(即能使硝酸鹽還原)的細(xì)菌被稱為硝酸鹽還原細(xì)菌,主要生活在土壤和水環(huán)境中,它們當(dāng)中有假單胞菌、依氏螺菌、脫氮小球菌等。在土壤及水環(huán)境中,由于好氧性機(jī)體的呼吸作用,氧被消耗,造成局部的厭氧環(huán)境,這時(shí)如果環(huán)境中有硝酸鹽存在,硝酸鹽還原細(xì)菌就能通過(guò)厭氧呼吸進(jìn)行生活,但如果在有氧條件下,這些菌則是通過(guò)有氧呼吸進(jìn)行生活-----氧的存在可抑制位于細(xì)胞膜上的硝酸鹽還原酶的活性。這類菌通常也被作為兼性厭氧菌。 硝酸鹽還原菌的反硝化作用對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)及地球物質(zhì)循環(huán)都具有重要意義: 1)反硝化作用可使土壤中植物能利用的氮(硝酸鹽NO3-)還原成氮?dú)舛В瑥亩档土送寥赖姆柿,?duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)不利?朔聪趸饔玫挠行Х椒ㄖ皇撬赏,保持土壤的疏松狀態(tài),排除過(guò)多的水分,保證土壤中有良好的通氣條件(此時(shí)菌行有氧呼吸) 2)反硝化作用在氮素循環(huán)中也有重要作用。硝酸鹽是一種容易溶解于水的物質(zhì),通常通過(guò)水從土壤流入水域中。如果沒(méi)有反硝化作用,硝酸鹽將在水中積累,會(huì)導(dǎo)致水質(zhì)變壞與地球上氮素循環(huán)的中斷。 厭氧呼吸的產(chǎn)能較有氧呼吸少,但比發(fā)酵多,它使微生物在沒(méi)有氧的情況下仍然可以通過(guò)電子傳遞和氧化磷酸化來(lái)產(chǎn)生ATP,因此對(duì)很多微生物是非常重要的。除氧以外的多種物質(zhì)可被各種微生物用作最終電子受體,充分體現(xiàn)了微生物代謝類型的多樣性。 異養(yǎng)微生物和自養(yǎng)微生物在最初能源上盡管存在著巨大的差異,但它們生物氧化的本質(zhì)卻是相同的,即都包括脫氫、遞氫和受氫三個(gè)階段,其間經(jīng)過(guò)與磷酸化反應(yīng)相偶連,就可以產(chǎn)生生命活動(dòng)所需要的通用能源,ATP。但從具體類型看,自養(yǎng)微生物中的生物氧化與產(chǎn)能的類型很多、途徑復(fù)雜,有些化能自養(yǎng)菌的生物氧化與產(chǎn)能過(guò)程至今還了解很少。不論是化能無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)型,還是光能無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)型的微生物,在它們生命活動(dòng)中最重要的反應(yīng)就是把CO2先還原成[CH2O]水平的簡(jiǎn)單有機(jī)物,然后再進(jìn)一步合成復(fù)雜的細(xì)胞成分。這是一個(gè)大量耗能和耗還原力[H]的過(guò)程。在化能無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)型微生物中,其所需能量ATP是通過(guò)還原態(tài)無(wú)機(jī)物經(jīng)過(guò)生物氧化產(chǎn)生的,還原力[H]則一般是通過(guò)耗ATP的無(wú)機(jī)氫的逆呼吸鏈傳遞而產(chǎn)生的; 化能自養(yǎng)微生物以無(wú)機(jī)物作為能源,一般產(chǎn)能效率低,生長(zhǎng)慢,但生態(tài)學(xué)角度看,它們所利用的能源物質(zhì)是一般化能異養(yǎng)生物所不能利用的,因此它們與產(chǎn)能效率高、生長(zhǎng)快的化能異養(yǎng)微生物之間并不存在生存競(jìng)爭(zhēng)。 嗜鹽菌的細(xì)胞膜可分成紅色和紫色二部分,前者主要含細(xì)胞色素和黃素蛋白等用于氧化磷酸化的呼吸鏈載體,后者則十分特殊,在膜上呈斑片狀(直徑約0.5 ?m)獨(dú)立分布,其總面積約占細(xì)胞膜的一半,這就是能進(jìn)行獨(dú)特光合作用的紫膜。 含量占紫膜75%的是一種稱為細(xì)菌視紫紅質(zhì)(bacteriorhodopsin)的蛋白質(zhì),它與人眼視網(wǎng)膜上的柱狀細(xì)胞中所含的一種蛋白質(zhì)------視野紫紅質(zhì)(rhodpsin)十分相似,二者都以紫色的視黃醛(retinal)作為輔基。 四種生理類型的微生物在不同光照和氧下的ATP合成 微生物 ATP的合成 有氧 無(wú)氧 光照 黑暗 光照 黑暗 光合細(xì)菌 – – + – 綠藻 + – – – 兼性厭氧菌(E. coli) + + + + 鹽生鹽桿菌 + + + – 目前認(rèn)為,細(xì)菌視紫紅質(zhì)與葉綠素相似,在光量子的驅(qū)動(dòng)下,具有質(zhì)子泵的作用,產(chǎn)生質(zhì)子的跨膜運(yùn)輸而形成ATP。嗜鹽菌只有在環(huán)境中氧濃度很低和有光照的條件下才能合成紫膜。這時(shí),通過(guò)正常的氧化磷酸化已無(wú)法滿足其能量需要,轉(zhuǎn)而由紫膜的光合磷酸化來(lái)提供。 通過(guò)紫膜的光能轉(zhuǎn)化而建立的質(zhì)子梯度除了可驅(qū)動(dòng)ATP的合成外,還可為嗜鹽菌在高鹽環(huán)境中建立跨膜的鈉離子電化學(xué)梯度,并由此完成一系列的生理生化功能。 嗜鹽菌紫膜光合磷酸化的發(fā)現(xiàn),使經(jīng)典的葉綠素和細(xì)菌葉綠素(菌綠素)所進(jìn)行的光合磷酸化之外又增添了一種新的光合作用類型。紫膜的光合磷酸化是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的最簡(jiǎn)單的光合磷酸化反應(yīng),這是研究化學(xué)滲透作用的一個(gè)很好的研究模型。 第六章 采用培養(yǎng)平板計(jì)數(shù)法要求操作熟練、準(zhǔn)確,否則難以得到正確的結(jié)果: 1)樣品充分混勻; 2)每支移液管及涂布棒只能接觸一個(gè)稀釋度的菌液; 3)同一稀釋度三個(gè)以上重復(fù),取平均值; 4)每個(gè)平板上的菌落數(shù)目合適,便于準(zhǔn)確計(jì)數(shù); 一個(gè)菌落可能是多個(gè)細(xì)胞一起形成,所以在科研中一般用菌落形成單位(colony forming units, CFU)來(lái)表示,而不是直接表示為細(xì)胞數(shù)。 The most probable number method(液體稀釋法) 1)未知樣品進(jìn)行十倍稀釋; 2)取三個(gè)連續(xù)的稀釋度平行接種多支試管并培養(yǎng); 3)長(zhǎng)菌的為陽(yáng)性,未長(zhǎng)菌的為陰性; 4)查表推算出樣品中的微生物數(shù)目(統(tǒng)計(jì)學(xué)原理); 遲緩期的特點(diǎn): 1)細(xì)胞形態(tài)變大或增長(zhǎng),例如巨大芽孢桿菌,在遲緩期末,細(xì)胞的平均長(zhǎng)度比剛接種時(shí)長(zhǎng)6倍。一般來(lái)說(shuō)處于遲緩期的細(xì)菌細(xì)胞體積最大; 2)細(xì)胞內(nèi)RNA,尤其是rRNA含量增高,合成代謝活躍,核糖體、酶類和ATP的合成加快,易產(chǎn)生誘導(dǎo)酶。 3) 對(duì)外界不良條件反應(yīng)敏感。 以上特征說(shuō)明細(xì)胞處于活躍生長(zhǎng)中,只是分裂遲緩。在此階段后期,少數(shù)細(xì)胞開(kāi)始分裂,曲線略有上升。 對(duì)數(shù)期到穩(wěn)定期的轉(zhuǎn)變是細(xì)胞重要的分化調(diào)節(jié)階段: 1)開(kāi)始儲(chǔ)存糖原等內(nèi)含物; 2)形成芽孢或建立自然感受態(tài)(芽孢桿菌); 3)發(fā)酵過(guò)程積累代謝產(chǎn)物的重要階段;某些放線菌抗生素的大量形成也在此時(shí)期 衰亡期特點(diǎn): 1)細(xì)菌代謝活性降低; 2)細(xì)菌衰老并出現(xiàn)自溶; 3)產(chǎn)生或釋放出一些產(chǎn)物;如氨基酸、轉(zhuǎn)化酶、外肽酶或抗生素等。 4)菌體細(xì)胞呈現(xiàn)多種形態(tài),有時(shí)產(chǎn)生畸形,細(xì)胞大小懸殊;有些革蘭氏染色反應(yīng)陽(yáng)性菌此時(shí)會(huì)變成陰性反應(yīng) 恒濁連續(xù)發(fā)酵與單批發(fā)酵相比的優(yōu)點(diǎn): 1) 縮短發(fā)酵周期,提高設(shè)備利用率; 2) 便于自動(dòng)控制; 3) 降低動(dòng)力消耗及體力勞動(dòng)強(qiáng)度; 4) 產(chǎn)品質(zhì)量較穩(wěn)定; 磺胺是葉酸組成部分對(duì)氨基苯甲酸的結(jié)構(gòu)類似物 磺胺的抑菌作用是因?yàn)楹芏嗉?xì)菌需要自己合成葉酸而生長(zhǎng)。 磺胺對(duì)人體細(xì)胞無(wú)毒性,因?yàn)槿巳狈膶?duì)氨基苯甲酸合成葉酸的相關(guān)酶----二氫葉酸合成酶,不能用外界提供的對(duì)氨基苯甲酸自行合成葉酸,而必須直接利用葉酸為生長(zhǎng)因子進(jìn)行生長(zhǎng)。 青霉素b-內(nèi)酰胺環(huán)結(jié)構(gòu)與D-丙氨酸末端結(jié)構(gòu)相似,從而能占據(jù)D-丙氨酸的位置與轉(zhuǎn)肽酶結(jié)合,并將酶滅活,肽鏈之間無(wú)法彼此連接,抑制了細(xì)胞壁的合成。 濕熱比干熱滅菌更好:1)更易于傳遞熱量;2)更易破壞保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的氫鍵等結(jié)構(gòu); 濕熱對(duì)一般營(yíng)養(yǎng)體和孢子的殺滅條件: 1) 多數(shù)細(xì)菌和真菌的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞:在60℃左右處理5-10分鐘;2)酵母菌和真菌的孢子:用80℃以上溫度處理; 2) 3)細(xì)菌的芽孢:121℃處理15分鐘以上 第七章 1939年,Max Delbruck & Emory Ellis對(duì)噬菌體(E. coli / bacteriopage)生長(zhǎng)特征的測(cè)定: 1、用噬菌體的稀釋液感染高濃度的宿主細(xì)胞;2、數(shù)分鐘后,加入抗噬菌體的抗血清(中和未吸附的噬菌體); 3、將上述混合物大量稀釋,終止抗血清的作用和防止新釋放的噬菌體感染其它細(xì)胞;4、保溫培養(yǎng)并定期檢測(cè)培養(yǎng)物中的噬菌體效價(jià)(對(duì)噬菌體含量進(jìn)行計(jì)數(shù));5、以感染時(shí)間為橫坐標(biāo),病毒的感染效價(jià)為縱坐標(biāo),繪制出病毒特征性的繁殖曲線; 有尾噬菌體:注射方式將噬菌體核酸注入細(xì)胞 1)通過(guò)尾部刺突固著于細(xì)胞;2)尾部的酶水解細(xì)胞壁的肽聚糖,使細(xì)胞壁產(chǎn)生小孔; 3)尾鞘收縮,核酸通過(guò)中空的尾管壓入胞內(nèi),蛋白質(zhì)外殼留在胞外; λ噬菌體的的溶源性反應(yīng): 1)早期基因表達(dá),產(chǎn)生gpcII,gpcro及gpcIII,后者可防止宿主的裂解酶對(duì)gpcII的降解。 2)gpcII的積累促使阻遏蛋白cI的表達(dá) 3)阻遏蛋白cI的積累導(dǎo)致噬菌體基因轉(zhuǎn)錄的終止,形成原噬菌體。 3) 早期表達(dá)的gpcro與cI的競(jìng)爭(zhēng)最終確定λ噬菌體是進(jìn)入溶源狀態(tài),還是進(jìn)入裂解循環(huán)。 4) ( gpcro表達(dá)得早,但與基因組的結(jié)合能力較cI弱) 5)阻遏蛋白cI的同樣可以抑制其它新侵入的λ噬菌體的表達(dá),從而使溶源性細(xì)菌具有“免疫性” 6)阻遏蛋白cI在一般情況下通過(guò)自身的轉(zhuǎn)錄激活保持低水平的表達(dá),但有時(shí)種種原因轉(zhuǎn)錄水平下降,會(huì)偶爾導(dǎo)致溶源性噬菌體進(jìn)入裂解循環(huán)(10-5~10 - 2)。 7)外界因素如紫外線可引起宿主的染色體的破壞,宿主產(chǎn)生應(yīng)急反應(yīng)合成具有DNA重組活性的RecA蛋白,導(dǎo)致cI的被降解,噬菌體進(jìn)入裂解循環(huán)。 8)誘發(fā)裂解是檢查是否存在溶原性細(xì)菌的有效方法 第八章 遺傳型:是指生物所攜帶的全部遺傳因子及基因,是遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ); 表型(表現(xiàn)型):具有一定遺傳型的個(gè)體,在特定環(huán)境條件下通過(guò)生長(zhǎng)發(fā)育所表現(xiàn)出來(lái)的形態(tài)等生物學(xué)特征的總和。 表型飾變:同樣遺傳型的生物,在不同的外界條件下,會(huì)呈現(xiàn)不同的表型,但這種表型的差異只與環(huán)境有關(guān),表現(xiàn)為暫時(shí)性和不可遺傳性,并且表現(xiàn)為全部個(gè)體的行為! 遺傳型變異(基因變異、基因突變):由于環(huán)境因素等的影響,導(dǎo)致遺傳物質(zhì)改變,導(dǎo)致生物特性改變,與表型的飾變相比,這種變異是可以遺傳的,而由于遺傳物質(zhì)的變異的頻率一般很低,所以這種變異也常常表現(xiàn)為群體中極少數(shù)個(gè)體的行為(突變頻率通常10-6-10-9)。 基因組(genome)一個(gè)物種的單倍體的所有染色體及其所包含的遺傳信息的總稱。 微生物基因組結(jié)構(gòu)的特點(diǎn): 1、原核生物(細(xì)菌、古生菌)的基因組 1)雙鏈環(huán)狀的DNA分子(單倍體),2)基因組上遺傳信息具有連續(xù)性,大腸桿菌和其它原核生物中基因數(shù)基本接近由它的基因組大小所估計(jì)的基因數(shù);一般不含內(nèi)含子,遺傳信息是連續(xù)的而不是中斷的。3)功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因組成操縱子結(jié)構(gòu) 操縱子(operon):功能相關(guān)的幾個(gè)基因前后相連,再加上一個(gè)共同的調(diào)節(jié)基因和一組共同的控制位點(diǎn)(啟動(dòng)子、操作子等)在基因轉(zhuǎn)錄時(shí)協(xié)同動(dòng)作。4)結(jié)構(gòu)基因的單拷貝及rRNA基因的多拷貝,5).基因組的重復(fù)序列少而短; 古生菌的基因組在結(jié)構(gòu)上類似于細(xì)菌。但是信息傳遞系統(tǒng)(復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯)則與細(xì)菌不同而類似于真核生物。具體內(nèi)容在微生物遺傳學(xué)中學(xué)習(xí) 2、真核微生物(啤酒酵母)的基因組 1)典型的染色體結(jié)構(gòu) 該基因大小為13.5×106bp,分布在16條染色體中。 象所有其它的真核細(xì)胞一樣,酵母菌的DNA也是與四種主要的組蛋白(H2A、H2B、H3和H4)結(jié)合構(gòu)成染色質(zhì)(chromatin)的14bp核小體核心DNA; 染色體DNA上有著絲粒(centromere)和端粒(telomere), 2)沒(méi)有明顯的操縱子結(jié)構(gòu), 3)有間隔區(qū)(即非編碼區(qū))和內(nèi)含子序列。 而原核生物中非編碼區(qū)或內(nèi)含子均非常少,而人類基因組測(cè)序后發(fā)現(xiàn)了大量的非編碼區(qū),被稱為基因組上的荒漠,估計(jì)只有5-10%用于編碼基因。 4)重復(fù)序列多 質(zhì)粒的檢測(cè): a) 提取所有胞內(nèi)DNA后電鏡觀察; b) 根據(jù)質(zhì)粒的分子大小和結(jié)構(gòu)特征,通過(guò)超速離心或瓊脂糖凝膠電泳可將質(zhì)粒與染色體DNA分開(kāi) c) 對(duì)于常用菌,可用質(zhì)粒所帶的某些特點(diǎn),如抗藥性初步判斷。(一般將菌點(diǎn)在相應(yīng)的抗性平板上,若抗性還在,證明質(zhì)?赡苓在,否則則可能質(zhì)粒已經(jīng)丟失,在實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常采用這種方法對(duì)含質(zhì)粒的菌株進(jìn)行初步檢測(cè)) d)但這種方法并不保險(xiǎn),因?yàn)橘|(zhì)?赡軙(huì)整和到染色體上,或者細(xì)菌由于某種突變而產(chǎn)生抗藥性等。 產(chǎn)細(xì)菌素的質(zhì)粒(Bacteriocin production plasmid) 抗生素 抑制或殺死近緣,甚至同種不同株的細(xì)菌 較廣的抗菌譜 通過(guò)核糖體直接合成的多肽類物質(zhì) 一般是次級(jí)代謝產(chǎn)物 編碼細(xì)菌素的結(jié)構(gòu)基因及相關(guān)的基因一般位于質(zhì)粒或轉(zhuǎn)座子上 一般無(wú)直接的結(jié)構(gòu)基因,相關(guān)酶的基因多在染色體上 很多細(xì)菌能產(chǎn)生能抑制或殺死近緣。甚至同種不同株的細(xì)菌的因子(細(xì)菌蛋白),被稱為細(xì)菌素,以和抗生素相區(qū)別?股匾话憔哂休^廣的抗菌譜。此外,抗生素一般是微生物的次級(jí)代謝產(chǎn)物(通過(guò)代謝過(guò)程而產(chǎn)生),而細(xì)菌素一般是直接通過(guò)核糖體直接合成的多肽類物質(zhì)。編碼細(xì)菌素的結(jié)構(gòu)基因及涉及細(xì)菌素運(yùn)輸及發(fā)揮作用(processing)的蛋白質(zhì)、及賦予宿主對(duì)該細(xì)菌素具有“免疫力”的相關(guān)產(chǎn)物的基因一般都位于質(zhì)粒或轉(zhuǎn)座子上,因此,細(xì)菌素可以殺死同種但不攜帶該質(zhì)粒的菌株。細(xì)菌素一般根據(jù)產(chǎn)生菌的種類進(jìn)行命名,例如大腸桿菌(E. coli)產(chǎn)生的細(xì)菌素為colicins(大腸桿菌素),而質(zhì)粒被稱為Col質(zhì)粒。而枯草芽孢桿菌(B. subtilis)產(chǎn)生的細(xì)菌素被命名為subtilisin(枯草桿菌素)。等等。 細(xì)菌素首先發(fā)現(xiàn)于大腸桿菌中,有多種col質(zhì)粒和產(chǎn)生多種colicins,其發(fā)揮作用的原理各不相同。例如,有的colicins從產(chǎn)生菌中釋放后,結(jié)合到敏感菌細(xì)胞膜特定的受體上,而該受體一般是負(fù)責(zé)一些重要物質(zhì),如一些生長(zhǎng)因子的運(yùn)輸?shù)模欢硗,有些colicins則阻止一些重要的細(xì)胞功能的進(jìn)行。還有一些colicins則在細(xì)胞膜上形成通道,造成鉀離子和質(zhì)子的外泄,使細(xì)胞失去能化膜而不能產(chǎn)生能量。Colicin E2是一種DNA內(nèi)切酶,能切斷細(xì)胞DNA,而colicin E3是一種核酸酶,能在16SrRNA的特定位點(diǎn)進(jìn)行切割從而使核糖體失活。 由G+細(xì)菌產(chǎn)生的細(xì)菌素或與細(xì)菌素類似的因子與colicins有所不同,但通常也是由質(zhì)粒基因編碼,有些甚至有商業(yè)價(jià)值,例如一種乳酸細(xì)菌產(chǎn)生的細(xì)菌素NisinA能強(qiáng)烈抑制某些G+細(xì)菌的生長(zhǎng),而被用于食品工業(yè)的保藏。 誘變劑與致癌物質(zhì)——Ames試驗(yàn) 原理:誘變劑的共性原則,即化學(xué)藥劑對(duì)細(xì)菌的誘變率與其對(duì)動(dòng)物的致癌性成正比:超過(guò)95%的致癌物質(zhì)對(duì)微生物有誘變作用;而90%以上的非致癌物質(zhì)對(duì)微生物沒(méi)有誘變作用 利用細(xì)菌突變來(lái)檢測(cè)環(huán)境中存在的致癌物質(zhì)是一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏的方法?梢酝ㄟ^(guò)某待測(cè)物質(zhì)對(duì)微生物的誘變能力間接判斷其致癌能力。 該方法是由美國(guó)加利福尼亞大學(xué)的Ames教授首先發(fā)明,因此又稱Ames試驗(yàn)。 該試驗(yàn)是利用鼠傷寒沙門(mén)氏菌(Salmonella typhmurium)的組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株(his-)的回復(fù)突變性能來(lái)進(jìn)行的。
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